奶牛邊緣無漿體病PCR診斷方法建立及MSP-5原核表達.pdf_第1頁
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1、黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)碩士學(xué)位論文奶牛邊緣無漿體病PCR診斷方法建立及MSP5原核表達姓名：周玉龍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：樸范澤侯喜林20070501AbstractDairycattleAnaplasmosisisoneoffrequentlyoccurring“strangefever“diseasesinHeiIongjiangprovinceinrecentyearsThediseasemainlyOCCURSf

2、romMaytoOctoberenddifficultlydifferentiatedfromotherssimilardiseasesRbringsaboutmanytroublesforclinicaldiagnosisFirstAmarginalelocalswainswereisolatedandidentifiedsothatAnaplasmosisisdeeplymseatghed；ThenpolymeraseChainre

3、actionassayfordetectingdairycattleAnaplasmosiswasdevelopedendsimplyappliedtoepidemiologicsurveyfordairycattleAnaplasmosisinpartialareasofHeilongjiangprovince；recombinantprokaryoticexpressionplasmidofms#wassuccessfullycon

4、structedfromisolated彳，marg／na／estrainandrMSP5wasobtainedTheseworkslaythefoundationforserodiagnosismethodandsubunitvaccineofAnaplasmosis(1)TheDNAsofbloodsamplesofdailycattlewith“strangefever“symptomsfromDaqingAndaNenjiang

5、endQiqiha’el“inHeiLon西iangProvincewereharvestedtoamplifyAmarginalepartofrasp5bypolymemsechainreactionandpositiveclonesWClt。epickedoutandsequencedThephylngenedctreeandsequencehomologyoftheDNAsequencesofmsp5amongAmarginale

6、LZs嘶lL一marginaleisolatedSIlainsandsixsH2unsAmarg／na／erasp5inGenBankwereanalysedbyDNAStarsoRware(2)Apairofspecificprimerswasdesignedaccordingtothehighlyconservedpartofrasp5』marginalestrLZandisolatcdS；trainSwcreusedasposit

7、ivecontrol，thenPCRfordiagnosingAnaplsmosisWasdevelopedendappliedtoepidemiologicsurveyofdairycattleAnaplasmosisinpartiala黜ofHeiLon商iangProvince(3)Therasp5genewithBaraHIendSalIendonucleasositeswcreamplifiedbyusmgrepresenta

8、tiveAmarginalestrHQDNA笛templateofPCRreactionsthenthems#geneWasinsertedintotheprokaryoticexpressionvectorpQE30ThepQE30msp5plasmidwastransformedintoEcoilXLIBlue，thentherecombinationEcoliwasinducedbyIPTGtheexpressedproducts

9、wereidentifiedbySDSPAGE，thenWeStemblotassayWascardedouttoidentifyrecombinationproteinbyAntiHisTagMcAbTherMSP5WaspurifiedbyEleetroelutionTwoNewZealandmalerabbitsWel@immunizedwiththeproteintoobtainspecificantiseraswhichwer

10、ethenusedtocharacterizetheimmunogenicityofrMSP5endAmarginaleMSP5fromdairycattlebyWesternblotassay1Resnltsl(1)DNAsequencehomologybclweenclinicalsamplesandAmarginaleLZstrainweremolethen995％MeanwhilesequencehomologyofallDNA

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