犬附紅細(xì)胞體病形態(tài)學(xué)研究及PCR快速診斷方法的建立與應(yīng)用.pdf

1、本研究包括兩個(gè)試驗(yàn):試驗(yàn)一,犬附紅細(xì)胞體病形態(tài)學(xué)診斷方法的研究；試驗(yàn)二,犬附紅細(xì)胞體病PCR診斷方法建立與應(yīng)用。 實(shí)驗(yàn)一、犬附紅細(xì)胞體形態(tài)學(xué)研究及血液學(xué)指標(biāo)測(cè)定 無(wú)菌采集附紅細(xì)胞體感染犬的新鮮血液,用檸檬酸鈉抗凝,直接涂片鏡檢、姬姆薩染色、瑞士染色、吖啶橙染色鏡檢,觀察紅細(xì)胞及附紅細(xì)胞體的形態(tài)、運(yùn)動(dòng)特性；測(cè)定其紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白含量和血清膽紅素,血清谷-丙轉(zhuǎn)氨酶,血糖含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)附紅細(xì)胞體附著在紅細(xì)胞的表

2、面使其失去原來(lái)的形狀變?yōu)榄h(huán)形、球形、短桿形、啞鈴狀或星狀的閃光小體；附紅細(xì)胞體單個(gè)或聚合在一起存在于血漿中作搖擺、扭轉(zhuǎn)、翻滾等運(yùn)動(dòng)；血常規(guī)和血液生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果顯示隨著附紅細(xì)胞體感染強(qiáng)度的增加,紅細(xì)胞總數(shù)、紅細(xì)胞壓積、血紅蛋白含量下降；白細(xì)胞總數(shù)明顯升高；血清膽紅素,血清谷-丙轉(zhuǎn)升高；血糖含量下降。 實(shí)驗(yàn)二、犬附紅細(xì)胞體病PCR診斷方法的建立與應(yīng)用 根據(jù)Genbank中已經(jīng)發(fā)表的犬附紅細(xì)胞體基因序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物

3、,通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增出一條與目的片段大小一致,約630bp的基因片段,建立了犬附紅細(xì)胞體PCR快速檢測(cè)方法,并用于犬附紅細(xì)胞體的快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。研究結(jié)果表明該方法只能從犬附紅細(xì)胞體中擴(kuò)增出約630bp的基因片段,而犬細(xì)小病毒,大腸桿菌等,擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。敏感性試驗(yàn)表明該方法最低可檢測(cè)到10pg的DNA。利用該方法對(duì)臨床上12例疑似犬附紅細(xì)胞體血樣進(jìn)行檢測(cè),檢出率75％,而直接鏡檢的陽(yáng)性檢出率僅為66.7％。這些試