附紅細(xì)胞體病流行病學(xué)及綜合防治技術(shù)的研究.pdf

1、本文對附紅細(xì)胞體(EH)病的檢測方法、流行規(guī)律、免疫致病機(jī)理和藥物治療進(jìn)行了深入研究，建立了豬、犬EH PCR檢測方法，具有高度的特異性和敏感性。較為詳細(xì)的調(diào)查了上海地區(qū)豬、犬EH病流行情況，掌握了EH病的流行特點(diǎn)和流行規(guī)律，為防控該病提供了科學(xué)數(shù)據(jù)。建立了豬EH小鼠、大鼠跨種間感染動物模型。將人醫(yī)治療瘧原蟲的藥物青蒿琥酯和治療血液疾病藥物維甲酸應(yīng)用到EH的治療，發(fā)現(xiàn)二者均有顯著療效，為防控該病提供了具體方法。具體研究結(jié)果如下：

2、 一、附紅細(xì)胞體實(shí)驗(yàn)室檢測方法的建立。 通過光鏡(鮮血壓滴片、瑞氏．姬姆薩染色)、透射電鏡及PCR檢測方法，觀察了豬、犬EH顯微、超微結(jié)構(gòu)，擴(kuò)增了豬、犬EH的特異片段。發(fā)現(xiàn)無論是鮮血滴片還是瑞氏．姬姆薩染色涂片，均能清晰得觀察到EH的形態(tài)結(jié)構(gòu)，但此法易產(chǎn)生假陽性，需要PCR．輔助診斷。電鏡技術(shù)可以觀察EH的超微結(jié)構(gòu)，其結(jié)果可以作為診斷依據(jù)，但操作復(fù)雜。 根據(jù)已有豬EH片段設(shè)計(jì)引物，擴(kuò)增得到810 bp PCR產(chǎn)物。根據(jù)已

3、發(fā)表的不同物種EH的16S rRNA序列設(shè)計(jì)特異性物，在170 bp處擴(kuò)增得到犬EH目的片段。所建立的豬、犬EH的PCR方法均具有高度的特異性和敏感性，可以作為EH的流行病學(xué)調(diào)查。同時，對EH顯微和超微結(jié)構(gòu)的觀察的過程中發(fā)現(xiàn)EH通過纖絲附著于紅細(xì)胞表面，這可能是EH引起紅細(xì)胞變形、溶血的病理學(xué)基礎(chǔ)。 二、上海地區(qū)EH流行情況調(diào)查。分別應(yīng)用鮮血滴片和PCR方法對上海地區(qū)豬、犬EH的流行情況作了初步調(diào)查。發(fā)現(xiàn)豬EH鏡檢陽性率為97.

4、77％，PCR檢測陽性率為93.06％。不同日齡和性別豬EH感染率無顯著差異。但是隨著日齡的增高EH感染率有逐漸增加的趨勢，雌性豬感染率高于雄性。提示上海區(qū)豬群普遍感染EH，感染率較高。 上海地區(qū)犬場、診所和居民家中犬EH感染率高于30％，犬場的感染最高，其次是寵物診所，居民家中感染率最低。兩種檢測方法比較結(jié)果表明PCR的檢測更為準(zhǔn)確、靈敏。如此高的EH感染率給公共衛(wèi)生安全帶來了潛在危脅，對EH的綜合防控技術(shù)進(jìn)行研究勢在必行。

5、 三、人工感染豬EH對小鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響。首先通過腹腔注射攻毒，PCR和電鏡檢測，建立了豬EH的SPF小鼠感染模型。利用此模型進(jìn)行紅細(xì)胞RBC-IC黏附酵母菌花環(huán)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)EH感染組的RBC-IC花環(huán)率顯著下降，表明EH感染降低了機(jī)體免疫功能，這可能是EH致病的免疫學(xué)基礎(chǔ)。 四、注射用青蒿琥酯及維甲酸(X)對EH治療效果的研究。通過體外藥敏試驗(yàn)觀察青蒿琥酯、維甲酸、貝尼爾、咪唑苯脲對豬紅細(xì)胞EH感染率的影響，發(fā)現(xiàn)含青

6、蒿琥酯和維甲酸的藥物組能夠顯著降低EH感染率。表明兩種藥物均可以作為治療EH的候選藥物。在此基礎(chǔ)上建立SPF鼠(大鼠、小鼠)EH感染動物模型，用青蒿琥酯、維甲酸、復(fù)方磺胺和復(fù)方強(qiáng)力霉素治療EH病豬及人工感染EH的小鼠和大鼠。結(jié)果表明，維甲酸(X)療效顯著，而青蒿琥酯需調(diào)整到合適的劑量才能發(fā)揮藥效，說明給藥濃度與療效相關(guān)。而復(fù)方磺胺和復(fù)方強(qiáng)力霉素均無明顯療效。 通過本項(xiàng)研究，建立了豬、犬EH檢測方法，包括光鏡(鮮血壓滴片、瑞氏-姬

7、姆薩染色)、透射電鏡及PCR．檢測方法，全面系統(tǒng)調(diào)查上海地區(qū)豬和犬EH病的流行情況，掌握上海地區(qū)EH病的流行規(guī)律和流行特點(diǎn)，為制定防控EH病有效措施提供了科學(xué)依據(jù)。在此基礎(chǔ)上建立了SPF鼠(大鼠、小鼠)EH感染動物模型，開展EH對紅細(xì)胞體免疫功能的影響的研究，探索了EH免疫致病機(jī)理：開展了藥物療效研究，篩選出了兩種高效、安全、特異、無毒副作用的藥物，填補(bǔ)了國內(nèi)外研究的空白，對防止EH在人類大爆發(fā)流行作前期的理論與技術(shù)儲備具有重要意義，為