貝伐單抗逆轉(zhuǎn)鼻咽癌耐藥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文貝伐單抗逆轉(zhuǎn)鼻咽癌耐藥的實(shí)驗(yàn)研究姓名：劉輝申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專(zhuān)業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：羅榮城20070529摘要血管7 ￡成中處于核心地位，是目前已知活性最強(qiáng)、專(zhuān)屬性最高的血管生成因子。針對(duì)V E G F 的人源化單克隆抗體貝伐單抗( b e v a c i z u m a b ) 2 0 0 4 年被美國(guó)F D A 批準(zhǔn)用于晚期結(jié)直腸癌的一線治療。V E G F 及其受體在多種腫瘤中廣泛表達(dá)，據(jù)報(bào)道在鼻咽癌細(xì)胞中的

2、陽(yáng)性率為6 0 ％~ 9 0 ％，而且V E G F 的表達(dá)與鼻咽癌臨床特征和不良預(yù)后有關(guān)。已經(jīng)有3 0 多個(gè)臨床試驗(yàn)將貝伐單抗應(yīng)用于各種實(shí)體腫瘤和血液系統(tǒng)腫瘤治療中，包括鼻明癌在內(nèi)的多種腫瘤的I I 、I I I 期臨床試驗(yàn)結(jié)果顯示了b e v a c i z u m a b 的良好效果。臨床觀察到聯(lián)合V E G F 單抗和化療藥所建立的生物化療模式取得的有效率不僅遠(yuǎn)優(yōu)于單用化療或V E G F 單抗，而且超過(guò)= 者代數(shù)和，特別是對(duì)一

3、部份復(fù)發(fā)的／轉(zhuǎn)移的病人，已經(jīng)無(wú)效的化療藥物在使用b e v a c i z u m a b 等分子靶向藥物后重新恢復(fù)敏感性。似乎b e v a c i z u m a b 的抗腫瘤作用除了抑制腫瘤血管形成以外，還包括增加腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，麗后者很可能是通過(guò)逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟冢? ．誘導(dǎo)建立人鼻咽癌g e m c i t a b i n e 耐藥細(xì)胞系并研究其生物學(xué)特性。2 ．在體外研究b e v a c

4、i z u m a b 對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞的影響，探討是否有逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥的作用。研究方法：1 ．根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，用R T —P C R 方法對(duì)5 —8 F 、C 6 6 6 —1 、C N E 2 等鼻咽癌細(xì)胞系進(jìn)行V E G F 及V E G F R 一2 表達(dá)陽(yáng)性篩選，最終檢測(cè)到C N E 2 細(xì)胞系表達(dá)V E G F 及V E G F R - 2 。人鼻咽癌低分化細(xì)胞系C N E 2 培養(yǎng)于含1 0 ％小牛血清高糖D M E M 培

5、養(yǎng)基，培養(yǎng)條件為3 7 ℃5 ％c 0 2 飽和濕度孵箱。含0 ．2 5 ％胰蛋白酶和0 ．0 2 ％E D T A 的完全消化液消化傳代。采用藥物大劑量沖擊法和濃度梯度遞增法建立人鼻咽癌吉西他濱多藥耐藥細(xì)胞亞系c N E 2 ／G 伽，采用四甲基偶氮唑藍(lán)( M T T ) 法檢測(cè)C N E 2 和C N E 2 ／G e m 對(duì)吉西他濱、順鉑、5 - 氟尿嘧啶、長(zhǎng)春新堿等4 種常用抗腫瘤藥物的半數(shù)抑制濃度( I C 。) 和耐藥系數(shù)(