阿霉素-粉防己堿脂質(zhì)體對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1-ADM逆轉(zhuǎn)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：（1）建立人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/ADM并研究其耐藥特性及生物學(xué)特性。（2）研究粉防己堿（Tetrandrine，Tet）對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株NNE-1/ADM的逆轉(zhuǎn)作用及其可能機(jī)制。（3）研究阿霉素-粉防己堿脂質(zhì)體對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株NNE-1/ADM的逆轉(zhuǎn)作用及其可能機(jī)制。 方法：（1）采用逐步遞增阿霉素（Adriamycin，ADM）濃度，間歇作用體外誘導(dǎo)法培養(yǎng)建立人鼻咽癌HNE-1耐藥細(xì)胞模型HNE-1/AD

2、M。MTT法測(cè)定HNE-1和HNE-1/ADM細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線、交叉耐藥性和耐藥指數(shù)；用光鏡、電鏡檢測(cè)HNE-1/ADM細(xì)胞株形態(tài)學(xué)變化；流式細(xì)胞儀檢測(cè)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/ADM細(xì)胞周期的變化。（2）采用MTT法測(cè)定粉防己堿對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/ADM的逆轉(zhuǎn)作用；流式細(xì)胞儀檢測(cè)粉防己堿對(duì)HNE-1/ADM細(xì)胞株凋亡作用的影響；免疫組化法和Western blot檢測(cè)HNE-1/ADM細(xì)胞中P-gp、Bax和Bcl-2

3、蛋白的表達(dá)水平。（3）采用MTT法測(cè)定阿霉素-粉防己堿脂質(zhì)體對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/ADM的逆轉(zhuǎn)作用；流式細(xì)胞儀檢測(cè)阿霉素-粉防己堿脂質(zhì)體對(duì)HNE-1/ADM細(xì)胞凋亡作用的影響；免疫組化法和Western blot檢測(cè)HNE-1/ADM細(xì)胞中P-gp、Bax和Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。 結(jié)果：（1）歷時(shí)4月建立了人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/ADM，該細(xì)胞株耐藥性能穩(wěn)定，耐藥指數(shù)為10.913倍；并且HNE-1/ADM細(xì)

4、胞株與5-氟尿嘧啶（5-Fluorouracil，5-FU）、順鉑（Cisplatin，DDP）、長(zhǎng)春新堿（Vincristine，VCR）等多種抗癌藥有不同程度的交叉耐藥性。HNE-1/ADM細(xì)胞株的細(xì)胞形態(tài)與親代細(xì)胞HNE-1相比較發(fā)生了變化；體外細(xì)胞群體倍增時(shí)間較親代細(xì)胞延長(zhǎng)11.86h；細(xì)胞周期分析結(jié)果顯示HNE-1/ADM耐藥細(xì)胞株S期與G0/G1期細(xì)胞減少、G2/M期細(xì)胞增多。（2）粉防己堿能逆轉(zhuǎn)HNE-1/ADM對(duì)抗腫瘤藥

5、物ADM的耐藥性，使其耐藥指數(shù)從10.913降至3.130；1.0μg/ml Tet不能誘導(dǎo)HNE-1/ADM細(xì)胞凋亡，但其可以提高ADM對(duì)耐藥細(xì)胞的凋亡作用；免疫組化法和Western blot檢測(cè)HNE-1/ADM細(xì)胞株中P-gp、Bcl-2、Bax的蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn)，粉防己堿作用于HNE-1/ADM細(xì)胞后，P-gp、Bcl-2的蛋白表達(dá)降低，Bax的蛋白表達(dá)增強(qiáng)。（3）阿霉素-粉防己堿脂質(zhì)體與Tet相比能更好地逆轉(zhuǎn)HNE-1/ADM細(xì)

6、胞耐藥作用，使其耐藥指數(shù)從10.913降至1.348，逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為7倍；流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示ADM-Tet脂質(zhì)體對(duì)HNE-1/ADM細(xì)胞凋亡率高于ADM+Tet對(duì)HNE-1/ADM細(xì)胞的凋亡率（p<0.05）；ADM-Tet脂質(zhì)體可顯著降低耐藥細(xì)胞中P-gp和Bcl-2的蛋白表達(dá)（p<0.05），促進(jìn)Bax的蛋白表達(dá)（p<0.05）。 結(jié)論：（1）建立了人鼻咽癌耐藥細(xì)胞株HNE-1/ADM，該細(xì)胞株具有耐藥細(xì)胞株的耐藥特性和生物學(xué)特

7、性，是研究人鼻咽癌耐藥機(jī)制及篩選逆轉(zhuǎn)劑較理想的細(xì)胞模型。（2）粉防己堿能逆轉(zhuǎn)HNE-1/ADM對(duì)抗腫瘤藥物ADM的耐藥性，能提高ADM對(duì)耐藥細(xì)胞的凋亡作用，其機(jī)制可能與降低耐藥蛋白P-gp的表達(dá)，降低調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2表達(dá)和增強(qiáng)Bax的表達(dá)有關(guān)。（3）與粉防己堿對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞HNE-1/ADM逆轉(zhuǎn)作用相比較，阿霉素-粉防己堿脂質(zhì)體對(duì)人鼻咽癌耐藥細(xì)胞HNE-1/ADM具有更好的逆轉(zhuǎn)作用，能提高HNE-1/ADM的細(xì)胞凋亡率，其