鼻咽癌多藥耐藥與放療相關(guān)性的研究.pdf

1、目的 研究鼻咽癌細(xì)胞株多藥耐藥及多藥耐藥逆轉(zhuǎn)與鼻咽癌放療敏感性的關(guān)系，探討鼻咽癌細(xì)胞株體外化療誘導(dǎo)耐藥前后放射治療敏感性的改變，并研究不同耐藥逆轉(zhuǎn)方法逆轉(zhuǎn)治療后對耐藥細(xì)胞放射治療敏感性的影響；同時研究鼻咽癌細(xì)胞株體外分割放射治療前后多藥耐藥表達的改變，及放療后和放療過程中間斷給予逆轉(zhuǎn)耐藥治療對多藥耐藥表達的影響。同時分析臨床鼻咽癌組織P-gp、GST-π、TOPⅡ和MRP蛋白的表達與病理、臨床分期及放化療近期療效的相關(guān)性。

2、 結(jié)果 1.MTT法測定不同濃度DDP作用后CNE1、CNE2細(xì)胞系的IC50值分別為0.35、0.23μmol/L，CNE1/DDP、CNE2/DDP細(xì)胞株的IC50值分別為6.72、4.16μmol/L。CsA對CNE1/DDP和CNE2/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為5.01和9.67倍，IFN對CNE1/DDP和CNE2/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.95和2.34倍，CsA+IFN對CNE1/DDP和CNE2/DDP細(xì)胞

3、的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為6.34和11.89倍?？梢?，3.0μmol/L環(huán)孢素A、500U/mlIFN單獨、聯(lián)合應(yīng)用對CNE1/DDP、CNE2/DDP均有逆轉(zhuǎn)耐藥作用，CsA對CNE1/DDP和CNE2/DDP細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)作用明顯優(yōu)于IFN(P＜0.01)，且CsA和IFN聯(lián)用的逆轉(zhuǎn)作用優(yōu)于CsA、IFN單藥應(yīng)用的逆轉(zhuǎn)效果(P＜0.01)?？寺⌒纬蓪嶒烇@示：CNE1/DDP、CNE1/DDP+CsA、CNE1/DDP+IFN、CNE1/DDP+

4、CsA+IFN四組細(xì)胞克隆形成率分別為73.67±2.08、73.00±2.65、74.00±2.65、73.33±1.53，方差分析顯示無統(tǒng)計學(xué)差異，可見CsA、IFN單獨和聯(lián)合用藥對CNE1/DDP細(xì)胞均無細(xì)胞毒性；CNE2/DDP、CNE2/DDP+CsA、CNE2/DDP+IFN、CNE2/DDP+CsA+IFN四組細(xì)胞克隆形成率分別為69.33±2.52、68.00±2.65、68.67±3.06、68.33±3.79，方差分

5、析顯示無統(tǒng)計學(xué)差異，可見CsA、IFN單獨和聯(lián)合用藥對CNE2/DDP細(xì)胞均無細(xì)胞毒性。 2.單擊多靶模型擬合的細(xì)胞存活曲線及放射生物學(xué)參數(shù)顯示：CNE1細(xì)胞的SF2為0.641，CNE1/DDP的SF2為0.686，CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥組的SF2為0.619；CNE2細(xì)胞的SF2為0.187，CNE2/DDP細(xì)胞的SF2為0.355，CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥組的SF2為0.277?？梢?，CNE1細(xì)胞經(jīng)DDP誘導(dǎo)耐藥后，放療敏感

6、性無明顯改變，給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥處理后放療敏感性亦無明顯改變；CNE2細(xì)胞經(jīng)DDP誘導(dǎo)耐藥后放療敏感性下降，給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥處理后放療敏感性有所上升，但是仍然低于親本細(xì)胞株。 3.流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示：CNE1細(xì)胞MDR1、MRP、GST-π陽性率分別為33.76±3.98、41.92±3.89、53.60±6.28；經(jīng)過放射治療誘導(dǎo)后MDR1、MRP、GST-π陽性率均較照射前明顯上調(diào)(P＜0.01)，分別為6

7、1.12±5.92、58.27±3.81、86.00±5.62；放療誘導(dǎo)耐藥后給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥組的MDR1、MRP陽性率較照射組明顯下調(diào)(P＜0.01)，分別為38.69±3.86、45.79±3.04，與未照射組相比無顯著差異(P＞0.05)；放療過程中給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥組的MDR1、MRP陽性率與照射組相比無明顯差異(P＞0.05)，分別為59.02±2.31、57.43±2.97;放療后逆轉(zhuǎn)耐藥組、放療中逆轉(zhuǎn)耐藥

8、組的GST-π陽性率與照射組相比均無顯著差異(P＞0.05)；CNE1細(xì)胞TOPⅡ在未照射組、照射組、放療后逆轉(zhuǎn)耐藥組和放療中逆轉(zhuǎn)耐藥組的表達均較低，分別為2.91±1.10、1.44±0.75、2.28±1.64、2.45±0.75，四者相比均無顯著差異(P＞0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示：CNE2細(xì)胞MDR1、MRP、GST-π陽性率分別為16.56±3.17、10.71±0.90、29.80±2.22；經(jīng)過放射治療誘導(dǎo)后MDR1、

9、MRP、GST-π陽性率均較照射前明顯上調(diào)(P＜0.01)，分別為47.99±4.51、45.60±4.32、59.75±4.12；放療誘導(dǎo)耐藥后給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥組的MDR1、MRP陽性率較照射組明顯下調(diào)(P＜0.01)，分別為19.97±4.57、15.52±4.68，與未照射組相比無顯著差異(P＞0.05)；放療過程中給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥組的MDR1、MRP陽性率與照射組相比無明顯差異(P＞0.05)，分別為45.2

10、5±1.43、42.99±4.93；放療后逆轉(zhuǎn)耐藥組、放療中逆轉(zhuǎn)耐藥組的GST-π陽性率與照射組相比均無顯著差異(P＞0.05)；CNE2細(xì)胞TOPⅡ在未照射組、照射組、放療后逆轉(zhuǎn)耐藥組和放療中逆轉(zhuǎn)耐藥組的表達均較低，分別為1.61±0.87、1.89±0.79、2.49±1.34、1.91±0.71，四者相比均無顯著差異(P＞0.05)。RT-PCR顯示，放療后CNE1、CNE2細(xì)胞mdr1、MRP、GST-πmRNA水平表達上調(diào)，放

11、療后和放療中給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥治療對CNE1、CNE2細(xì)胞mdr1、MRP、GST-πmRNA水平表達均無逆轉(zhuǎn)下調(diào)作用。TOPⅡmRNA在CNE1、CNE2細(xì)胞均表達較低，且逆轉(zhuǎn)耐藥對TOPⅡmRNA表達無影響。MTT法測定不同濃度DDP作用后CNE1/RT、CNE2/RT、CNE1/RT-C、CNE2/RT-C細(xì)胞生長存活率并計算各組的IC50值分別為7.24、6.35、1.08、0.44μmo1/L，從細(xì)胞水平證實在放療過程

12、中間斷給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥治療可以逆轉(zhuǎn)放射治療誘導(dǎo)的多藥耐藥，對CNE1/RT、CNE2/RT的逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為6.70、14.43倍。 4.鼻咽癌組織P-gp、GST-π、TOPⅡ和MRP蛋白表達與病理、臨床分期及放化療近期療效的相關(guān)性： P-gp蛋白在角化型細(xì)胞癌、未角化型分化細(xì)胞癌、未分化型細(xì)胞癌中的表達率分別為60.0％、30.8％、11.1％，GST-π在三種病理類型的表達分別為60.0％、69.2％、66

13、.7％，TOPⅡ在在三種病理類型的表達分別為20.0％、30.8％、48.2％，MRP在在三種病理類型的表達分別為40.0％、46.2％、48.2％，統(tǒng)計分析表明：P-gp蛋白的表達與鼻咽癌病理類型相關(guān)，而GST-π、TOPⅡ、MRP表達與鼻咽癌組織類型無關(guān)。P-gp在臨床Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期的表達分別為33.3％、18.8％、23.5％、22.2％，GST-π則分別為66.7％、62.5％、70.6％、66.7％，TOPⅡ分別為33.3％

14、、43.8％、35.3％、44.4％，MRP分別為0％、43.8％、52.9％、55.6％，統(tǒng)計分析表明：P-gp、GST-π、TOPⅡ、MRP的表達與鼻咽癌臨床分期無關(guān)。統(tǒng)計分析表明：P-gp、GST-π、TOPⅡ、MRP的表達與鼻咽癌近期療效不具有相關(guān)性。 結(jié)論 多藥耐藥與鼻咽癌放療敏感性密切相關(guān)。不同病理類型鼻咽癌細(xì)胞株經(jīng)化療誘導(dǎo)耐藥后放療敏感性的改變不同，且逆轉(zhuǎn)耐藥治療對不同病理類型鼻咽癌細(xì)胞耐藥株放療敏感性的改

15、變不同；逆轉(zhuǎn)耐藥濃度的環(huán)孢素A和IFN無論單藥還是聯(lián)合應(yīng)用對CNE1/DDP、CNE2/DDP細(xì)胞均無明顯的細(xì)胞毒作用；放射治療誘導(dǎo)后鼻咽癌細(xì)胞株P(guān)-gp、MRP、GST-π、TOPⅡ蛋白水平和mRNA水平表達改變不同；P-gp、MRP、GST-π與放射治療誘導(dǎo)鼻咽癌多藥耐藥相關(guān)，TOPⅡ與放射治療誘導(dǎo)鼻咽癌多藥耐藥無關(guān)；在放療后給與CsA+IFN逆轉(zhuǎn)耐藥治療可以逆轉(zhuǎn)鼻咽癌細(xì)胞部分多藥耐藥蛋白水平的表達，對多藥耐藥基因mRNA水平的表達