葉酸代謝信號通道與鼻咽癌耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、鼻咽癌是耳鼻咽喉頭頸部的常見惡性腫瘤，以放療為主，化療可以改善預(yù)后，但化療過程中容易產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞對化療藥物的抵抗，鼻咽癌化療藥物抵抗是當(dāng)前的熱點(diǎn)問題。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，葉酸受體1基因在鼻咽癌化療藥物抵抗過程中起重要作用，因此探討葉酸受體及代謝信號通路，對闡明鼻咽癌化療藥物抵抗有重要意義。 目的： 研究葉酸代謝通路的關(guān)鍵酶葉酸受體基因1(FOLR1)、二氫葉酸還原酶(DHFR)、絲氨酸羥甲基轉(zhuǎn)移酶(SHMT)、胸苷酸合

2、成酶(TS)與鼻咽癌抵抗紫杉醇化療藥物的相關(guān)性，探討鼻咽癌抵抗化療藥物的分子機(jī)制。 方法： 1.采用集落形成實(shí)驗(yàn)(colony formation assay)檢測葉酸對鼻咽癌親本細(xì)胞株CNE-1和相應(yīng)的耐藥細(xì)胞株CNE-1/Taxol的影響。 2.以人鼻咽癌細(xì)胞株CNE-1、HNE-2細(xì)胞及相應(yīng)的紫杉醇耐藥細(xì)胞株CNE-1/Taxol.、HNE-2/Taxol為研究對象，用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)測

3、定葉酸代謝通路中關(guān)鍵酶FOLR1、DHFR、SHMT、TS在鼻咽癌親本細(xì)胞及耐藥細(xì)胞珠中的表達(dá)差異，觀察其與鼻咽癌耐藥的關(guān)系。 3.用免疫組化SP法檢測FOLR1在鼻咽癌組織與鼻咽正常組織中的表達(dá)差異。 結(jié)果： 1.乏葉酸培養(yǎng)的耐藥細(xì)胞的集落抑制率顯著高于乏葉酸培養(yǎng)的親本細(xì)胞集落抑制率(P<0.05)，耐藥細(xì)胞的生長比親本細(xì)胞更依賴于葉酸。 2.通過RT-PCR檢測了葉酸代謝通路關(guān)鍵酶FOLR1、DHFR

4、、SHMT、TS基因在鼻咽癌耐藥株CNE-1/Taxol和HNE-2/Taxol中的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)FOLR1、DHFR和SHMT在耐藥株CNE-1/Taxol、HNE-2/Taxol中的表達(dá)顯著高于其相應(yīng)的親本細(xì)胞CNE-1和HNE-2，提示葉酸代謝通路一些關(guān)鍵酶的變化可能與鼻咽癌抵抗紫杉醇化療藥物具有相關(guān)性。 3.FOLR1在正常鼻咽組織中無表達(dá)，而在鼻咽癌組織中有較低的陽性表達(dá)率，其陽性細(xì)胞數(shù)從0-42％不等，平均(23.85±