高遷移率族蛋白1介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:動(dòng)脈粥樣硬化炎癥是導(dǎo)致斑塊進(jìn)展及斑塊不穩(wěn)定的重要因素。高遷移率族蛋白1(HMGB1)可以通過(guò)多條途徑促進(jìn)炎癥發(fā)展。本研究的目的是研究探討HMGB1介導(dǎo)的炎癥對(duì)斑塊進(jìn)展的作用及機(jī)制。
　　方法:(1)8周齡SPF級(jí)C57BL/6雄性小鼠12只以及C57BL/6系A(chǔ)poE-/-雄性小鼠12只分別作為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組，每組分為兩個(gè)亞組，早中期組（10周高脂飲食）及晚期組（20周高脂飲食）。10周、20周后處死小鼠，主動(dòng)脈竇冰凍切片用

2、于油紅O染色評(píng)估斑塊大小，巨噬細(xì)胞免疫組化染色用于定位巨噬細(xì)胞;主動(dòng)脈竇石蠟切片用于HMGB1免疫組化染色檢測(cè)HMGB1表達(dá)。(2)ApoE-/-雄性小鼠14只隨機(jī)分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組.實(shí)驗(yàn)組每日給予腹腔注射HMGB1抑制劑丙酮酸乙酯(EP，50mg/Kg)，對(duì)照組每日給予等量生理鹽水。12周高脂飲食后，麻醉處死小鼠，血清測(cè)定血脂水平，主動(dòng)脈竇冰凍切片用于油紅O染色評(píng)估斑塊大小，巨噬細(xì)胞免疫組化染色用于評(píng)估巨噬細(xì)胞含量;HMGB1免疫組化

3、染色及western blot用于檢測(cè)HMGB1表達(dá)。RT-qPCR檢測(cè)HMGB1受體TLR2、TLR4，單核細(xì)胞趨化因子MCP-1和腫瘤壞死因子TNF-α的mRNA表達(dá)水平。(3) THP-1細(xì)胞經(jīng)佛波酯(PMA，100ng/ml)刺激分化為巨噬細(xì)胞，分別與oxLDL(50mg/L)及oxLDL(50mg/L)+EP(5mmol/L)共培養(yǎng)24h后取細(xì)胞爬片油紅O染色評(píng)估脂質(zhì)吞噬情況，免疫組化評(píng)估HMGB1在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)情況，RT-qP

4、CR檢測(cè)炎癥因子白細(xì)胞介素1β（IL-1β）。
　　結(jié)果:(1)HMGB1在正常小鼠主動(dòng)脈中主要表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞胞核，在ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中，主要表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞胞核亦有表達(dá);早中期動(dòng)脈粥樣硬化的HMGB1的表達(dá)高于晚期動(dòng)脈粥樣硬化HMBG1的表達(dá)（0.05+0.007 vs.0.02±0.005，P＜0.05）;晚期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積比高于早中期動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積比（0.40±0.03

5、 vs.0.25+0.02，P＜0.05）。(2)HMGB1表達(dá)抑制組HMGB1表達(dá)減少85％，HMGB1表達(dá)抑制組斑塊面積（289845±26450μm2 vs.499247+45880μm2，P＜0.05）及斑塊面積比（22.7％+2.1％ vs.39.1％±3％，P＜0.05）明顯減少，斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞含量降低（11.3％+8％ vs.39.24％+13.85％, P＜0.05），TLR2、TLR4、MCP-1、TNF-α mRNA

6、的表達(dá)水平分別降低59％，39％，47％，45％。(3)oxLDL可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞表達(dá)HMGB1及IL-1β，丙酮酸乙酯能夠抑制oxLDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞HMGB1及IL-1β的表達(dá)，可減少巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)（4.89％±0.8％vs.8.44％±1.2％，P＜0.05）。
　　結(jié)論:(1)HMGB1在斑塊組織中高表達(dá)，HMGB1在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞;早中期HMGB1的表達(dá)高于晚期。(2)HMG