樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在動脈粥樣硬化中的作用.pdf

1、動脈粥樣硬化(Atherosclerosis，AS)及其引起的臨床后果，如冠心病，已經(jīng)成為當(dāng)今社會威脅人類健康的頭號殺手。近年的研究提出AS是一種自身免疫性疾病這一新觀點(diǎn)，認(rèn)為內(nèi)源性抗原(如氧化型低密度脂蛋白(ox—LDL)、熱休克蛋白(HSP60)等)和外源性抗原(如微生物等)激活的以Thl為主的免疫反應(yīng)是導(dǎo)致AS發(fā)病的原因。樹突狀細(xì)胞(dendriticcells，DCs)是體內(nèi)最重要的專職免疫呈遞細(xì)胞，在免疫過程中起重要調(diào)控作用。

2、目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在人血管組織中存在血管樹突狀細(xì)胞，參與了AS的病理發(fā)生全過程。但目前對DCs在AS中的作用研究尚屬起步階段。本研究從病理學(xué)、細(xì)胞水平和臨床流行病學(xué)等多個(gè)角度研究DCs在AS免疫機(jī)制中的作用，全文由三個(gè)部分組成： 第一部分：樹突狀細(xì)胞及其來源的泡沫細(xì)胞在兔動脈粥樣硬化病變中的分布 目的：研究樹突狀細(xì)胞及其來源的泡沫細(xì)胞在高脂飲食所致兔動脈粥樣硬化硬化病變中的分布。 方法：建立高膽固醇飲食致新西蘭兔動脈粥

3、樣硬化模型，取主動脈進(jìn)行免疫組化和電鏡觀察，S一100抗體染色用于鑒定樹突狀細(xì)胞來源的泡沫細(xì)胞，電鏡用于觀察其超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。 結(jié)果：免疫組化染色觀察發(fā)現(xiàn)，在正常動脈內(nèi)膜中，樹突狀細(xì)胞分布極少；在動脈粥樣硬化病變中，樹突狀細(xì)胞主要分布在內(nèi)膜的泡沫細(xì)胞富集區(qū)域，部分表現(xiàn)出泡沫細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征。電鏡觀察發(fā)現(xiàn)部分樹突狀細(xì)胞胞漿內(nèi)見大量脂滴沉積，呈現(xiàn)典型的泡沫細(xì)胞特點(diǎn)。 結(jié)論：樹突狀細(xì)胞在高脂飲食導(dǎo)致的兔AS中表達(dá)，在AS發(fā)病中具

4、有重要的作用。本研究的另外一個(gè)重要結(jié)果是發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)致AS條件下，樹突狀細(xì)胞可轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，提示樹突狀細(xì)胞可能是動脈粥樣硬化內(nèi)泡沫細(xì)胞的一個(gè)新來源。 第二部分：氧化型低密度脂蛋白和非諾貝特干預(yù)對樹突狀細(xì)胞的免疫成熟的影響 目的：氧化型低密度脂蛋白(oxidized一10wdensny¨poprotein，ox—LDL)誘導(dǎo)的人單核細(xì)胞源的樹突狀細(xì)胞(dendrniccells，DC)免疫成熟的作用，及PPARQ

5、激動劑非諾貝特對ox—LDL的作用的影響。 方法：采用免疫磁珠法分離人外周血CDl4+單核細(xì)胞，經(jīng)含rhGM—CSF(1OOng／m1)和rhIL一4(20ng／m1)的Cellgro培養(yǎng)5天，使其分化為未成熟DC。給予非諾貝特(100umol／L)預(yù)干預(yù)24小時(shí)后，加入50μg／m1的0x—LDL再干預(yù)48小時(shí)，流式細(xì)胞術(shù)檢測DC表型(CDla，CD40，CD86，HLA—DR)，F(xiàn)ITC-Dextran檢測DC吞噬功能，乩I

6、SA檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清細(xì)胞因子(工L一12，IL一10和TNF—a)濃度。 結(jié)果：ox—LDL可增加DC的免疫表型的表達(dá)(CDla、CD40、CD86和HLA—DR)減弱DC吞噬功能，促進(jìn)DC細(xì)胞因子的分泌(TNF、IL一1O和IL一12，P

7、誘導(dǎo)的DC的免疫成熟，這可能是其抗動脈粥樣硬化的一個(gè)重要機(jī)制。 第三部分：冠心病患者外周血樹突狀細(xì)胞亞型的變化的研究 目的：樹突狀細(xì)胞(DC)的兩個(gè)亞型，髓樣DC(MDC)和漿細(xì)胞樣DC(PDC)分別是促使T輔助細(xì)胞(Th)向Thl和Th2免疫應(yīng)答轉(zhuǎn)化的抗原呈遞細(xì)胞。本研究冠心病患者外周血中樹突狀細(xì)胞(DC)及其亞型比例及絕對數(shù)的變化。方法：32例于我院行冠狀動脈造影(CAG)的患者分為冠心病組(n=21)和C

8、AG正常組(n=11)，采用流式細(xì)胞儀三色分析方法測定患者外周血中DC及其亞型的比例和絕對數(shù)。其中DC以Lin1-HLA—DR+確定，髓樣DC(MDC)以Lin1一HLA—DR+CD11c+確定，漿細(xì)胞樣DC(PDC)以LinrHLA—DR+CDl23+確定。結(jié)果：與CAG正常組相比，冠心病組外周血DC的比例沒有顯著性升高(p=0．07)，但是DC絕對數(shù)明顯升高(p=O．04)，其中MDC的比例和絕對數(shù)均有明顯升高(p<0．05)，而P