肺炎克雷伯菌質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶耐藥基因研究.pdf

1、目的：了解湖南地區(qū)中南大學(xué)三所附屬醫(yī)院(湘雅醫(yī)院、湘雅二醫(yī)院、湘雅三醫(yī)院)肺炎克雷伯菌中質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶的檢出情況,確定其基因型,進行流行病學(xué)分析,了解產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶菌株的耐藥性,為臨床治療提供參考。
　　 方法：收集中南大學(xué)三所附屬醫(yī)院2004年10月至2005年7月間非重復(fù)肺炎克雷伯菌110株,保存于脫脂牛奶管中,放置于-70℃冰箱。所有菌株采用法國生物梅里埃公司的全自動微生物鑒定系統(tǒng)VITEK-

2、2的GN卡鑒定和AST GN-13卡進行藥敏分析。采用頭孢西丁紙片試驗對110株非重復(fù)肺炎克雷伯菌進行AmpC酶初篩,提取初篩陽性菌株的質(zhì)粒,以其為模板采用多重PCR法進行blaMOX、blaCIT、blaDHA、blaACC、blaEBC、blaFOX型基因擴增,用特異性引物對陽性菌株進行相應(yīng)基因整個開放閱讀框PCR擴增,將特異性PCR擴增的DNA產(chǎn)物純化后進行測序分析,通過BLAST將測序結(jié)果與基因庫已知序列進行對比分析,確定其基因

3、型。對證實攜帶質(zhì)粒AmpC酶的菌株采用腸桿菌科基因組內(nèi)重復(fù)一致序列聚合酶鏈反應(yīng)(ERIC-PCR)進行菌株DNA的同源性分析。
　　 結(jié)果：從110株臨床分離的非重復(fù)肺炎克雷伯菌中共檢出對頭孢西丁不敏感菌24株。提取其質(zhì)粒作為模板,經(jīng)多重PCR擴增24株肺炎克雷伯菌中有21株獲得陽性結(jié)果,均攜帶DHA型質(zhì)粒AmpC酶基因。以特異性DHA引物進一步擴增及測序,經(jīng)GenBank網(wǎng)上同源性比較,本次試驗菌株所攜帶的質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶耐

4、藥基因全部為DHA-1型耐藥基因。對攜帶DHA型耐藥基因的菌株進行ERIC-PCR流行病學(xué)分型,21株肺炎克雷伯菌ERIC-PCR圖譜可分為6種克隆類型,結(jié)果顯示在一些肺炎克雷伯菌中存在ERIC-PCR圖譜類型的高度一致性。藥敏檢測結(jié)果顯示產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的肺炎克雷伯菌對大多數(shù)新型廣譜β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥,對亞胺培南敏感。
　　 結(jié)論：(1)湖南地區(qū)臨床分離的肺炎克雷伯菌中已經(jīng)出現(xiàn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶菌株,基因型以DHA-1型

5、為主。加強對肺炎克雷伯菌產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpCβ-內(nèi)酰胺酶的檢測,對控制質(zhì)粒AmpC酶傳播具有重大的意義。(2)在一定程度上DHA-1型質(zhì)粒介導(dǎo)的AmpCβ-內(nèi)酰胺酶存在克隆傳播,其耐藥性除了通過質(zhì)粒傳播外還能夠水平傳播,給臨床抗感染治療帶來重大威脅。(3)對產(chǎn)AmpC酶菌引起感染的治療,應(yīng)根據(jù)細菌藥敏試驗結(jié)果,合理選擇有效的抗菌藥物治療。產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的肺炎克雷伯菌對大多數(shù)新型廣譜β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥,碳青霉烯類和第四代頭孢菌素可