多重耐藥肺炎克雷伯菌同源性及其β-內(nèi)酰胺酶基因型研究.pdf

1、該研究收集了我院2000年5~8月重癥監(jiān)護(hù)病房(ICU)臨床分離的耐藥譜相似的多重耐藥肺炎克雷伯菌6株.采用濃度梯度法測(cè)定6株菌株對(duì)13種抗菌藥物的最低抑菌濃度;脈沖場(chǎng)凝電泳(PFGE)分析其同源性;接合試驗(yàn)分析耐藥基因傳播機(jī)制;采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增臨床分離菌株及其相應(yīng)接合子的耐藥基因,設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增的耐藥基因包括SHV-1、TEM-1、CTX-M-1組、CTX-M-2組、CTX-M-8組、CTX-M-9組、OXA-2組、OXA

2、-10組及質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶FOX-1組.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行克隆測(cè)序,確定β-內(nèi)酰胺酶基因型.采用等電聚焦電泳(soelectric Focus, IEF)測(cè)定臨床分離的菌株及接合子β-內(nèi)酰胺酶等電點(diǎn).并對(duì)新發(fā)現(xiàn)的CTX-M-22基因進(jìn)行原核表達(dá),對(duì)表達(dá)重組菌進(jìn)行ESBLs鑒定及表達(dá)蛋白的等電點(diǎn)測(cè)定.結(jié)果顯示6株臨床分離的肺炎克雷伯菌對(duì)多種抗菌藥物耐藥,耐藥譜基本一致,接合子耐藥譜與原始菌相似.原始菌對(duì)亞胺培南高度敏感,對(duì)哌拉西林/三唑

3、巴坦、頭孢哌酮/舒巴坦和頭孢吡肟的最低抑菌濃度(MIC)值增高.對(duì)其余檢測(cè)的抗菌藥物高度耐藥.但原始菌株加克拉維酸后,頭孢他啶MIC仍≥256μg/ml.6株肺炎克軒伯菌的PFGE條帶及位置一致.6株細(xì)菌的接合子均有等電點(diǎn)(pIs)5.4,7.7,8.0,8.2和8.4的條帶,pI7.7的條帶能被氯唑西林抑制,而其他條帶則能被克拉維酸抑制.PCR擴(kuò)增接合子TEM、SHV和CTX-M-1基因呈陽性反應(yīng),克隆測(cè)序分別為TEM-1、SHV-1