肺炎克雷伯菌超廣譜β內(nèi)酰胺酶與AmpC酶的耐藥表型及基因型分析.pdf

1、目的：肺炎克雷伯菌是臨床感染的常見致病菌之一，近年來由于產(chǎn)酶株的流行蔓延使其耐藥性大大增強(qiáng)、二次感染機(jī)率大，成為流行病學(xué)研究和防治工作中的難題。本課題對臨床收集的肺炎克雷伯菌從細(xì)菌學(xué)分析、抗菌藥物敏感性試驗(yàn)以及超廣譜β內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase，ESBLs)與質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的分子生物學(xué)分類等方面進(jìn)行研究，探討本地區(qū)肺炎克雷伯菌流行病學(xué)特性，為臨床肺炎克雷伯菌感染的鑒定和治療提供可靠依據(jù)。

2、 方法：1、臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)分析：本試驗(yàn)收集淄博地區(qū)2007年6月-2008年8月臨床送檢的血液、尿液、痰、胸腹水、分泌物等感染性標(biāo)本。常規(guī)操作進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，采用英國SENSITITRE ARIS熒光快速微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。2、抗菌藥物敏感試驗(yàn)：根據(jù)美國臨床標(biāo)準(zhǔn)委員會(NCCLS)推薦的K-B法檢測肺炎克雷伯菌各菌株對常用抗菌藥物的敏感性。3、ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的表型檢測：根據(jù)藥敏結(jié)果初篩產(chǎn)ESBLs和Amp

3、C酶菌株，經(jīng)CLSI/NCCLS紙片確認(rèn)試驗(yàn)檢測ESBLs，三維確認(rèn)試驗(yàn)檢測質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶。4、ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的基因型分析：運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)，以多組引物擴(kuò)增產(chǎn)酶株的質(zhì)粒DNA，通過擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖譜分析ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的基因型。 結(jié)果：1、臨床標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)分析：本實(shí)驗(yàn)共檢出淄博地區(qū)非重復(fù)的肺炎克雷伯菌68株。2、抗菌藥物敏感試驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，肺炎克雷伯菌主要對亞胺培南、頭孢哌酮/

4、舒巴坦和頭孢吡肟敏感性較高，而對三代頭孢類抗生素高度耐藥。3、ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的表型檢測：從68株肺炎克雷伯菌中檢出產(chǎn)ESBLs陽性株20株、產(chǎn)質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶陽性株3株、二者均陽性2株，分別所占比例為29.4％、4.4％和2.9％。4、ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的基因型分析：運(yùn)用PCR技術(shù)可快速精確地分析兩種酶的基因型，結(jié)果ESBLs主要為TEM型和CTX-M型，AmpC酶以DHA型為主。 結(jié)論：1、臨床標(biāo)

5、本的細(xì)菌學(xué)分析：應(yīng)用常規(guī)細(xì)菌分離培養(yǎng)方法即可獲得肺炎克雷伯菌的純生長，應(yīng)用熒光快速微生物鑒定/藥敏分析系統(tǒng)可實(shí)現(xiàn)細(xì)菌的快速準(zhǔn)確鑒定。2、抗菌藥物敏感試驗(yàn)：本實(shí)驗(yàn)選用NCCLS推薦的K-B法對肺炎克雷伯菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)方法成熟、技術(shù)完善、并建立了各藥物敏感性判定標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能更好地服務(wù)于臨床。3、ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)AmpC酶的表型檢測：本實(shí)驗(yàn)選用NCCLS推薦的紙片確認(rèn)試驗(yàn)和三維試驗(yàn)分別檢測ESBLs和質(zhì)粒介導(dǎo)Amp