肺炎克雷伯氏菌產(chǎn)CTX-M型超廣譜β內(nèi)酰胺酶的檢測及其耐藥性研究.pdf

1、目的: 了解本地區(qū)肺炎克雷伯氏菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶 (ESBLs)情況及CTX-M型ESBLs基因型分布；分析產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯氏菌耐藥性及其耐藥特點(diǎn)。 方法： 1.紙片擴(kuò)散法（Kerby-Bauer 法，K-B法）：采用美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會（NCCLS）推薦的K-B法,檢測102株肺炎克雷伯氏菌對15種抗生素的耐藥性。 2. 初步篩選試驗(yàn)（screening test）:選用頭孢噻肟、頭孢他

2、定、氨曲南、頭孢曲松、頭孢泊肟藥敏紙片,凡頭孢泊肟或頭孢他定的抑菌環(huán)直徑≤22 mm；頭孢曲松≤25 mm；氨曲南或頭孢噻肟≤27 mm；提示這些菌株為可疑ESBLs產(chǎn)生株，進(jìn)一步作確證試驗(yàn)。 3. 紙片確證試驗(yàn)（confirmatory test）:將初篩可疑產(chǎn)ESBLs菌株同時用頭孢他定和頭孢他定加克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟加克拉維酸作藥敏試驗(yàn),對任何一組藥物，加克拉維酸比不加克拉維酸的抑菌環(huán)直徑≥ 5 mm可確證為產(chǎn)ES

3、BLs菌株。上述三種試驗(yàn)均用肺炎克雷伯氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC700603作質(zhì)控。 4.PCR：檢測確證試驗(yàn)陽性的菌株攜帶的ESBLs基因型。根據(jù)blaCTX-M的序列設(shè)計四對引物，采用UNIQ-10柱式質(zhì)粒小量抽提試劑盒提取質(zhì)粒DNA用于PCR反應(yīng)模板。各標(biāo)本分別使用四對設(shè)計好的引物擴(kuò)增，CTX-M-I組、CTX-M-II組、CTX-M-III組、CTX-M-IV組陽性擴(kuò)增片段長度分別為499bp、351bp、307bp、474b

4、p。擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，紫外線檢測儀觀察結(jié)果并照相。 結(jié)果： 1. 受檢的102株肺炎克雷伯氏菌對15種抗生素的藥敏結(jié)果顯示，對氨芐西林的耐藥率最高，為87.25％；哌拉西林、頭孢唑啉次之，耐藥率分別是59.80％、53.92％；對頭孢曲松、頭孢噻肟、頭孢泊肟、氨曲南、環(huán)丙沙星的耐藥率分別是42.16％、42.16％、37.25％、36.27％、34.31％；對氨芐西林/舒巴坦、阿米卡星的耐藥率分別是22.55％、21

5、.57％；對頭孢他定、頭孢吡肟的耐藥率分別為16.67％、14.70％；對頭孢西丁耐藥率9.80％、哌拉西林/三唑巴坦的耐藥率為6.86％；所有菌株對亞胺培南敏感，耐藥率為0。 2. 初篩結(jié)果有65株可疑產(chǎn)ESBLs菌株，進(jìn)一步經(jīng)紙片確證試驗(yàn)有38株（37.25％）產(chǎn)ESBLs菌。其中頭孢噻肟與頭孢噻肟/克拉維酸組藥物檢出38（100％）株產(chǎn)ESBLs菌株，而用頭孢他定與頭孢他定/克拉維酸組檢出22（57.89％）株產(chǎn)ESBLs

6、菌株，二者相比有顯著差異（χ2檢驗(yàn)，P＜0.01）。 3. 產(chǎn)ESBLs與非產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯氏菌株對亞胺培南全部敏感；產(chǎn)ESBLs菌對哌拉西林/三唑巴坦耐藥率為10.53％，與非產(chǎn)ESBLs的細(xì)菌相比無差異（χ2檢驗(yàn)，P>0.05）；對頭孢西丁的耐藥率為18.42％，與非產(chǎn)ESBLs的細(xì)菌相比有差異（χ2檢驗(yàn)， P<0.05）；對頭孢吡肟、頭孢他定、阿米卡星、氨芐西林/舒巴坦、環(huán)丙沙星、氨曲南、頭孢泊肟、頭孢曲松、頭孢噻肟

7、、頭孢唑啉、哌拉西林的耐藥率明顯高于非產(chǎn)ESBLs菌株，產(chǎn)ESBLs細(xì)菌與非產(chǎn)ESBLs細(xì)菌相比有顯著差異（χ2檢驗(yàn)，P＜0.01）；產(chǎn)ESBLs菌株對氨芐西林全部耐藥，非產(chǎn)ESBLs菌株對氨芐西林耐藥率為79.69％，二者相比有差異（χ2檢驗(yàn)， P<0.05）。4. 38株產(chǎn)ESBLs菌株的PCR擴(kuò)增后電泳結(jié)果顯示CTX-M型18株（47.37％），其中5株（27.78％）細(xì)菌擴(kuò)增出CTX-M-I組酶（499bp）；3株細(xì)菌(16.6

8、7％)擴(kuò)增出CTX-M-II組酶（351bp）；第Ⅲ組引物尚未擴(kuò)增出陽性標(biāo)本；11株細(xì)菌(61.11％)擴(kuò)增出CTX-M-IV組酶（474bp）；1株細(xì)菌同時擴(kuò)增出CTX-M-I組酶和CTX-M-IV組酶。 結(jié)論： 1. 本地區(qū)肺炎克雷伯氏菌對青霉素類抗生素耐藥率很高，對大部分頭孢菌素類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類抗生素以及環(huán)丙沙星存在不同程度的較高耐藥，對氨芐西林/舒巴坦、阿米卡星、頭孢西丁、哌拉西林/三唑巴坦的耐藥率較低，對碳