產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌耐藥性及播散機(jī)制的體外研究.pdf

1、目的： 1.檢測(cè)溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二/育英兒童醫(yī)院2005年臨床分離的45株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌中整合子的整合酶及插入的相關(guān)基因盒情況，分析整合子對(duì)細(xì)菌耐藥性的影響。 2.了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌耐藥情況及該70株細(xì)菌的常見(jiàn)β-內(nèi)酰胺酶的基因型別。 3.觀察不同亞抑菌濃度的頭孢西丁，頭孢噻肟及頭孢他啶對(duì)其中共15株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌進(jìn)行不同時(shí)間的作用后，體外耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移率的變化情況

2、。 方法： 1.采用Kirby-Bauer(K-B)瓊脂擴(kuò)散法對(duì)45株臨床分離的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測(cè)45株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌Ⅰ類、Ⅱ類和Ⅲ類整合子；對(duì)Ⅰ類整合子陽(yáng)性菌進(jìn)行整合子相關(guān)基因盒檢測(cè)。 2.采用K-B瓊脂擴(kuò)散法檢測(cè)70株臨床分離的產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)14種抗生素的耐藥性，PCR法檢測(cè)其常見(jiàn)β-內(nèi)酰胺酶的基因型別，選部分PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。 3

3、.采用微量肉湯稀釋法檢測(cè)其中共15株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的頭孢西丁，頭孢噻肟及頭孢他啶MIC值，并以肉湯接合方法觀察該三種藥物不同的亞抑菌濃度及不同時(shí)間作用后耐藥質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移率變化情況。采用兩因素多水平的析因分析統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析結(jié)果。 4.采用微量肉湯稀釋法檢測(cè)經(jīng)頭孢西丁作用后各接合子對(duì)該藥物的MIC值。 結(jié)果： 1.45株菌中有27株(60.0％)含有Ⅰ類整合子，沒(méi)有檢測(cè)到Ⅱ類和Ⅲ類整合子陽(yáng)性菌。在Ⅰ類整合子

4、陽(yáng)性菌中，有23株攜帶Ⅰ類整合子相關(guān)基因盒(85.2％)，5種不同的基因盒圖譜，片段大小在600bp～2322bp之間，分離自同一科室的部分菌株攜帶大小相同的基因盒；Ⅰ類整合子陽(yáng)性菌株的耐藥率高于整合子陰性的菌株。 2.70株產(chǎn)ESBLs的大腸埃希菌對(duì)14種抗生素的敏感性排在前三位的是：亞胺培南(100％)，頭孢哌酮/舒巴坦(100％)，哌拉西林/他唑巴坦(94.1％)；PCR電泳結(jié)果提示：62(88.6％)株出現(xiàn)。TEM陽(yáng)性條

5、帶，5(7.1％)株出現(xiàn)SHV陽(yáng)性條帶，1(1.4％)株出現(xiàn)OXA陽(yáng)性條帶，61(87.1％)株出現(xiàn)CTX-M陽(yáng)性條帶，未見(jiàn)VEB及PER陽(yáng)性條帶，53(75.7％)株同時(shí)檢測(cè)到TEM和CTX-M陽(yáng)性條帶，2株未檢測(cè)到任何DNA擴(kuò)增片斷，陰性率為2.9％。 3.5株TEMPCR產(chǎn)物測(cè)序均為T(mén)EM-1型，3株SHVPCR和1株OXAPCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果不對(duì)。 4.不同亞抑菌濃度的頭孢西丁對(duì)5株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌進(jìn)行不同時(shí)

6、間作用后的接合轉(zhuǎn)移率結(jié)果為：在相同的時(shí)間作用下，不同亞抑菌濃度頭孢西丁對(duì)耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移率沒(méi)有影響(P＞0.05)；在相同亞抑菌濃度頭孢西丁條件下，不同時(shí)間的作用對(duì)接合率也沒(méi)有影響(P＞0.05)；并且不同時(shí)間與不同亞抑菌濃度之間對(duì)接合率也無(wú)交互作用(P＞0.05)。 5.頭孢西丁作用后各接合子對(duì)頭孢西丁的MIC值均高于供體菌。 6.不同亞抑菌濃度的頭孢噻肟對(duì)5株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌進(jìn)行不同時(shí)間作用后的接合轉(zhuǎn)移率結(jié)果為

7、：在相同的時(shí)間作用下，不同亞抑菌濃度頭孢噻肟對(duì)耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移率沒(méi)有影響(P＞0.05)；在相同亞抑菌濃度頭孢噻肟條件下，不同時(shí)間的作用對(duì)接合率有影響(P＜0.05)，6小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率最高，4小時(shí)和8小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率差不多，2小時(shí)和10小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率相近，前者高于后者；并且不同時(shí)間與不同亞抑菌濃度之間對(duì)接合轉(zhuǎn)移率無(wú)交互作用(P＞0.05)。 7.不同亞抑菌濃度的頭孢他啶對(duì)5株產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌進(jìn)行不同時(shí)間作用后的接合轉(zhuǎn)移

8、率結(jié)果為：在相同的時(shí)間作用下，不同亞抑菌濃度頭孢他啶對(duì)耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移率沒(méi)有影響(P＞0.05)；在相同亞抑菌濃度頭孢他啶條件下，不同時(shí)間的作用對(duì)接合率有影響(P＜0.05)，6小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率最高，2小時(shí)和4小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率一樣均低于8小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率，10小時(shí)的接合轉(zhuǎn)移率最低；并且不同時(shí)間與不同亞抑菌濃度之間對(duì)接合轉(zhuǎn)移率無(wú)交互作用(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.Ⅰ類整合子及整合子相關(guān)基因盒在產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌株中

9、分布廣泛，整合子在細(xì)菌耐藥中發(fā)揮作用。 2.產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)臨床常用抗生素均有較高的耐藥率，治療產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌引起的感染首選藥物為亞胺培南，其次為β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)合物及阿米卡星、頭霉素類。 3.產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌耐藥基因以TEM型，CTX-M型為主，臨床應(yīng)重視產(chǎn)ESBLs細(xì)菌的檢測(cè)，根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果合理用藥。 4.不同亞抑菌濃度藥物作用后，耐藥質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移率有隨藥物濃度降低而升高的趨勢(shì)；細(xì)