阪崎腸桿菌耐藥性分析、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測及耐藥機制研究.pdf

1、本研究參照美國臨床和實驗室標準化研究所(CLSI)相關(guān)標準，采用藥敏紙片方法，分別對分離自食品中的19株阪崎腸桿菌進行包括頭孢唑啉、頭孢噻吩、頭孢哌酮、頭孢曲松、頭孢呋辛鈉、頭孢吡肟、慶大霉素、妥布霉素、氨曲南、氨芐西林、環(huán)丙沙星、氯霉素、四環(huán)素、苯唑西林、哌拉西林、美洛培南在內(nèi)的共16種常規(guī)抗生素藥敏檢測。實驗結(jié)果表明，19株阪崎腸桿菌對苯唑西林以及頭孢噻吩的耐藥率分別為100％和78.95％，而對其余種類抗生素均呈現(xiàn)敏感反應(yīng)。另外，

2、本實驗還采用CLSI中關(guān)于腸桿菌科超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測標準，采用紙片擴散法對19株阪崎腸桿菌進行了超廣譜β-內(nèi)酰胺酶檢測，同時參照數(shù)據(jù)庫中超廣譜β-內(nèi)酰胺酶基因序列，采用涵蓋四大類β-內(nèi)酰胺酶，總共10種超廣譜β-內(nèi)酰胺酶擴增引物對菌株進行PCR檢測，兩種方法均未發(fā)現(xiàn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶陽性菌株，說明19株阪崎腸桿菌中不存在超廣譜β-內(nèi)酰胺酶。綜合以上結(jié)果說明，目前食品中存在的阪崎腸桿菌仍為耐藥性較弱的菌種，短時期內(nèi)將不會對臨床治療帶來

3、較大威脅。
　　 在阪崎腸桿菌耐藥檢測的基礎(chǔ)上，本論文還對阪崎腸桿菌耐藥機制進行了初步研究。實驗選取對頭孢噻吩耐藥性最強的8號阪崎腸桿菌，利用Tn-5轉(zhuǎn)座子進行隨機突變，以獲得頭孢噻吩耐藥相關(guān)基因，結(jié)果共得到轉(zhuǎn)座成功的阪崎腸桿菌單克隆共108株。以突變前菌株作為參照，通過抑菌濃度實驗，檢測在250μg/mL的頭孢噻吩存在的條件下，生長受到明顯抑制的阪崎腸桿菌突變株。結(jié)果顯示，共5株阪崎腸桿菌突變株在該濃度頭孢噻吩存在的狀況下，生