銅綠假單胞菌OXA型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥基因研究.pdf

1、目的：OXA型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)是由OXA-10，OXA-2和OXA-1三個(gè)基因來(lái)源的，共分為五組，以第一、二組為主，其主要存在于銅綠假單胞菌中。為了解湘雅醫(yī)院銅綠假單胞菌中OXA型ESBLs的檢出率及其基因的分布情況，開(kāi)展本次研究。 方法：收集中南大學(xué)湘雅醫(yī)院2006年9月至2007年1月的非重復(fù)銅綠假單胞菌97株，保存于脫脂牛奶管中，放置于-20℃冰箱。所有菌株采用法國(guó)梅里埃公司的全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)VITEK

2、-2的GN卡鑒定和AST GN-13卡進(jìn)行藥敏分析。對(duì)97株非重復(fù)銅綠假單胞菌采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)進(jìn)行OXA型ESBLs第一、二組基因篩查，然后用特異性引物對(duì)篩查陽(yáng)性的菌株進(jìn)行OXA基因擴(kuò)增，將PCR擴(kuò)增的DNA產(chǎn)物純化后進(jìn)行測(cè)序分析，并用BLAST將測(cè)序結(jié)果與基因庫(kù)已知序列進(jìn)行對(duì)比分析，確定其基因型。 結(jié)果:經(jīng)PCR法篩查共檢出3株OXA型ESBLs陽(yáng)性的銅綠假單胞菌，OXA型ESBLs檢出率為3.1％(3/97)，1株

3、(PA13)來(lái)自尿標(biāo)本，1株(PA15)來(lái)自痰標(biāo)本，1株(PA17)來(lái)自引流液標(biāo)本。這3株P(guān)CR擴(kuò)增陽(yáng)性的銅綠假單胞菌全部攜帶OXA型ESBLs第一組基因，OXA型ESBLs第二組未檢測(cè)到陽(yáng)性菌株。然后用OXA-10及其衍生物的特異性引物進(jìn)一步擴(kuò)增及測(cè)序，結(jié)果顯示，PA15和PA17的基因序列完全一致，另1株P(guān)A13為另一不同的基因序列，經(jīng)GenBank網(wǎng)上同源性比較，均未發(fā)現(xiàn)完全相同的核苷酸和氨基酸序列，提示這兩種基因序列為新的OXA