MtDNA導(dǎo)致SIRS的機(jī)制及氯喹與PDTC對(duì)SIRS保護(hù)效應(yīng)的初步探討.pdf

1、目的：創(chuàng)傷導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng)綜合征,甚至發(fā)生多器官功能衰竭。全身炎癥反應(yīng)綜合征的發(fā)病機(jī)制及防治至今仍未完全了解。現(xiàn)已知?jiǎng)?chuàng)傷后機(jī)體可產(chǎn)生大量的mtDNA,而mtDNA可激活P38蛋白激酶通路產(chǎn)生炎癥因子,導(dǎo)致全身炎癥綜合征,但是mtDNA否能通過(guò)TLR-9激活NF-κB通路并產(chǎn)生炎癥因子依然未知。本文采用體內(nèi)試驗(yàn),首先注射不同濃度MtDNA,檢測(cè)外周血各種炎癥因子的水平變化,觀察肺臟炎性浸潤(rùn)情況,探討mtDNA導(dǎo)致SIRS的機(jī)制;在

2、此基礎(chǔ)上以氯喹與PDTC為阻滯劑,初步了解氯喹與PDTC對(duì)于mtDNA導(dǎo)致SIRS的保護(hù)效應(yīng),為嚴(yán)重創(chuàng)傷救治中降低SIRS發(fā)生,防治多器官損傷及相關(guān)并發(fā)癥提供新思路。
　　方法：第一部分將大鼠分為8組;①緩沖液組(n=2)②nDNA(10ug/ml)組(n=14)③mtDNA(15ug/ml)組(n=14)④線粒體碎片(終濃度含mtDNA1μg/ml,MTD1)組(n=14)⑤mtDNA(5ug/ml)組(n=14)⑥線粒體碎片(

3、終濃度含mtDNA5μg/ml,MTD5)組(n=14)⑦mtDNA(15ug/ml)組(n=14)⑧線粒體碎片(終濃度含mtDNA15μg/ml,MTD15)組(n=14)。第二部分將大鼠分為4組:①mtDNA(15ug/ml)+氯喹(10mg/kg)組(n=14)②mtDNA(15ug/ml)+氯喹(30mg/kg)組(n=14)③mtDNA(15ug/ml)+PDTC(30mg/kg)組(n=14)④mtDNA(15ug/ml)+

4、PDTC(120mg/kg)組(n=14)。兩部分分別在1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí),利用多通道生理檢測(cè)儀檢查大鼠生命體征變化;用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)觀測(cè)外周血中TNF-α、IL-10、IL-6、的表達(dá)水平;用實(shí)時(shí)定量PCR(Real-time PCR)檢測(cè)肺組織中NF-κB亞單位p65mRNA、I-κBmRNA、TLR9mRNA的表達(dá);熒光定量PCR檢測(cè)外周血中mtDNA的水平;HE染色觀察

5、肝、肺、腎、腸的病理學(xué)變化。實(shí)驗(yàn)資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±s)表示。所有數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件采用單因素方差分析(one way ANoVA)及回歸與相關(guān)分析,P<0.05為差異有顯著性。
　　結(jié)果：
　　1.各組之間的大鼠血壓與呼吸沒(méi)有明顯變化,各實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)體溫明顯變化,但各組之間的體溫變化沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.注射緩沖液大鼠和nDNA的大鼠在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)外周血炎癥因子水平未見(jiàn)明顯變化;線粒體碎片

6、和mtDNA組在1小時(shí)炎癥因子水平開始升高,8小時(shí)到達(dá)高峰,隨著注射線粒體碎片和mtDNA濃度升高,炎癥水平越高,且含相應(yīng)mtDNA濃度的線粒體碎片比這種濃度的mtDNA炎癥因子水平高。
　　3.p65mRNA、I-κBmRNA在肺組織中的表達(dá)水平和炎癥因子、TLR9的表達(dá)水平升高有線性相關(guān)性。
　　4.p65mRNA、I-κBmRNA在肺組織中的表達(dá)水平呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。
　　5.氯喹與PDTC濃度越高,炎癥因子表達(dá)水平越