高烏甲素對(duì)燒傷SIRS大鼠的鎮(zhèn)痛作用及機(jī)制.pdf

1、目的：1.明確高烏甲素（Lappaconitine LA）對(duì)重度燒傷全身炎性反應(yīng)綜合征（Systemic Inflammatory response syndrome SIRS）大鼠的鎮(zhèn)痛效果；求證LA通過(guò)抑制脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞P2X4受體表達(dá)產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用；同時(shí)可減少炎癥因子釋放，減輕SIRS所致過(guò)度炎性狀態(tài)。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為兩部分；第一部分：應(yīng)用成年雄SD大鼠32只，隨機(jī)分為為A、B、C、D四組，每組8只，建立重度燒傷模型。

2、燒傷48h后行鞘內(nèi)注射，A組鞘內(nèi)注入10μl生理鹽水，B組注入TNP-ATP(30 nmol，10μl)，C組注入minocycline（50μg，10μl）， D組注入PPADS lOμl(10 nmoL／l)。注射后觀察大鼠行為學(xué)有無(wú)異常，并于注射前、后30min測(cè)量大鼠MWT。第二部分。應(yīng)用成年雄SD大鼠80只隨機(jī)分為正常對(duì)照組、假燒傷組、燒傷組、燒傷+LA組、正常+LA組，共5組，每組24只。建立重度燒傷SIRS模型。其中燒傷+

3、LA組、正常+LA組于燒傷前2h、燒傷后12、24、36、48、72h腹腔注射LA（6mg/kg）。觀察建模后、LA治療過(guò)程中各組大鼠疼痛行為學(xué)改變，并用電子von Fray纖維檢測(cè)機(jī)械刺激縮腿反射閾值（Mechanical withdrawal threshold MWT）的變化（燒傷前2h、燒傷后12、24、36、48、72h）。燒傷后48h時(shí)間點(diǎn)免疫熒光雙標(biāo)明確P2X4受體與OX-42受體在脊髓背角處的共表達(dá)情況。免疫組織化學(xué)法檢

4、測(cè)各組大鼠脊髓背角（L4-6）P2X4受體蛋白表達(dá)變化；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immunosorbent assay ELISA）各組大鼠血清中TNF-α、IL-1β在48h時(shí)間點(diǎn)表達(dá)水平。
　　結(jié)果：第一部分結(jié)果顯示：燒傷大鼠鞘內(nèi)微量注射小膠質(zhì)細(xì)胞活化抑制劑minocycline后30min觀察大鼠MWT較前顯著提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；鞘內(nèi)微量注射P2X1-4受體拮抗劑TNP-ATP后3

5、0min測(cè)燒傷大鼠MWT較注射前顯著提高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；鞘內(nèi)微量注射以及P2X1,2,3,5,7受體拮抗劑PPADS后30min測(cè)燒傷大鼠MWT無(wú)明顯改變，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。第二部分結(jié)果顯示：MWT及免疫組化結(jié)果示：燒傷組大鼠在重度燒傷SIRS建立后MWT明顯降低，48h達(dá)最低，并伴脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞P2X4受體表達(dá)上調(diào)，較正常對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；燒傷+LA組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)

6、MWT與燒傷組相比顯著升高，脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞P2X4受體與燒傷組大鼠比較表達(dá)下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。免疫熒光雙標(biāo)顯示：脊髓背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化，胞體肥大，表達(dá)OX42(綠色)，絕大部分小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)有P2X4受體(紅色)。48h時(shí)間點(diǎn)ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示：燒傷組血清炎性因子TNF-α、IL-1β表達(dá)顯著增加與對(duì)照組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）；燒傷+LA組血清炎性因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)量較燒傷組降低，