鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)對(duì)巨噬細(xì)胞TLR2、TLR4、Dectin-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　通過檢測(cè)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理過的巨噬細(xì)胞的TLR2、TLR4、Dectin-1 mRNA表達(dá)水平，明確角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)體系對(duì)巨噬細(xì)胞模式識(shí)別受體表達(dá)的影響。
　　方法:
　　取0～3天的C57BL/6J胎鼠，分離角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)至第2代，制備鼠角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng)基b液（KC-72h液），鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)基c液（KC-CA-72h液）。白色念珠臨床菌株在98℃

2、溫度下加熱10分鐘滅活。取9-12周齡C57BL/6J小鼠股骨、脛骨骨髓細(xì)胞分化誘導(dǎo)為成熟M1型巨噬細(xì)胞用于本實(shí)驗(yàn)。將實(shí)驗(yàn)分為:空白對(duì)照組、20％b液組、20％c液組，根據(jù)分組不同，用不同上清液分別預(yù)處理巨噬細(xì)胞12小時(shí)，收獲巨噬細(xì)胞，提取RNA，采用real-timePCR在mRNA水平檢測(cè)Dectin-1、TLR2、TLR4的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理后，巨噬細(xì)胞表達(dá)Dect

3、in1 mRNA的水平與空白對(duì)照組相比減少（P＜0.05）;鼠角質(zhì)形成細(xì)胞上清液能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞TLR4 mRNA表達(dá)，與空白對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理后，巨噬細(xì)胞表達(dá)TLR2、TLR4 mRNA的水平與空白對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)上清液處理后與僅經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞上清液處理后的巨噬細(xì)胞表達(dá)的TLR2、TLR4、Dectin

4、1 mRNA水平，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）;僅經(jīng)鼠角質(zhì)形成細(xì)胞上清液處理后巨噬細(xì)胞表達(dá)TLR2、Dectin1 mRNA的水平與空白對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)能夠抑制巨噬細(xì)胞Dectin-1 mRNA的表達(dá);僅經(jīng)角質(zhì)形成細(xì)胞上清液處理過的巨噬細(xì)胞，TLR4mRNA表達(dá)上升;鼠角質(zhì)形成細(xì)胞與白色念珠菌共培養(yǎng)對(duì)巨噬細(xì)胞TLR2、TLR4 mRNA的表達(dá)