布氏乳桿菌對(duì)斷奶獺兔腸道菌群、TLR2和TLR4基因表達(dá)的影響.pdf

1、隨著獺兔生產(chǎn)朝著規(guī)?；?、集約化發(fā)展，腹瀉已成為獺兔最主要的疾病之一，給獺兔養(yǎng)殖帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。腹瀉導(dǎo)致獺兔腸道菌群紊亂，腸道失去物理和生物的重要免疫屏障，Toll樣受體（Toll-like Receptor，TLR）識(shí)別和清除微生物入侵的功能同時(shí)也遭到破壞，而益生菌作為生物制劑在防治獺兔腹瀉方面有著巨大的潛力和天然的優(yōu)勢。因此，本研究就獺兔腹瀉發(fā)生后盲腸菌群結(jié)構(gòu)變化及斷奶獺兔飼喂布氏乳桿菌（Lactobacillus buchneri

2、，L.buchneri）后腸道菌群結(jié)構(gòu)、TLR2和TLR4基因表達(dá)情況進(jìn)行了研究，結(jié)果如下:
　　1.應(yīng)用PCR-DGGE和Quantitative PCR(qPCR)分析健康獺兔與腹瀉獺兔盲腸菌群結(jié)構(gòu)。結(jié)果顯示，腹瀉獺兔PCR-DGGE圖譜與健康獺兔比較差異不顯著(P＞0.05)，但香農(nóng)指數(shù)(H')、豐富度（Ea）、均勻度(S)腹瀉獺兔均高于健康獺兔，聚類分析和主成分分析(Principal component analysis

3、，PCA)能夠?qū)⒏篂a和健康獺兔區(qū)分為不同的簇。腹瀉獺兔盲腸梭菌類群Ⅳ、梭菌類群ⅩⅣa、白色瘤胃球菌、溶纖維丁酸弧菌和普拉梭桿菌等有益微生物數(shù)量顯著降低(P＜0.01)，而埃希氏大腸桿菌數(shù)量卻顯著升高(P＜0.05)，其他菌屬差異不顯著。表明，獺兔腹瀉發(fā)生后盲腸有益微生物數(shù)量降低，部分有害微生物數(shù)量升高;腹瀉與健康獺兔菌群結(jié)構(gòu)差異不顯著，腹瀉獺兔盲腸菌群結(jié)構(gòu)有復(fù)雜化的趨勢。
　　2.日糧中添加1.0×104CFU·g-1和1.0×1

4、05CFU·g-1L.buchneri對(duì)斷奶獺兔腸道菌群結(jié)構(gòu)、TLR2和TLR4基因表達(dá)的影響。60只斷奶獺兔（對(duì)照組、低劑量組和高劑量組）飼喂4周后，低劑量組獺兔體重總增重和日增重明顯高于對(duì)照組和高劑量組（P＜0.01），高劑量組與對(duì)照組比較差異不顯著（P＞0.05）。分別采用PCR-DGGE和qPCR比較各組腸道菌群結(jié)構(gòu)、qPCR分析腸道中TLRs表達(dá)情況、ELISA方法檢測外周血中細(xì)胞因子含量。結(jié)果顯示，獺兔腸道菌群豐富度從十二指

5、腸到盲腸呈“V”字形變化趨勢，空腸豐富度最低;L.buchneri添加組腸道菌群香農(nóng)指數(shù)（H'，十二指腸P＜0.01、空腸P＜0.01、盲腸P＜0.05）、豐富度（Ea，十二指腸P＜0.01、空腸P＜0.01、盲腸P＜0.05）、均勻度（S，十二指腸P＜0.01、空腸P＜0.01、盲腸P＜0.05）顯著增加，而回腸中H'、Ea、S只有低劑量組顯著增加(P＜0.01)，高劑量組差異不顯著（P＞0.05）。低劑量組和高劑量組獺兔空腸總菌（P

6、＜0.01）、厚壁菌門(P＜0.01)、擬桿菌門(P＜0.05)、腸桿菌科（P＜0.01）、梭菌類群Ⅳ(P＜0.05)和溶纖維丁酸弧菌(P＜0.01)數(shù)量顯著增加;回腸總菌(P＜0.()1)、厚壁菌門（P＜0.05）、擬桿菌門（P＜0.01）、梭菌類群Ⅳ(P＜0.01)、溶纖維丁酸弧菌(P＜0.05)和梭菌類群1(P＜0.01)數(shù)量顯著增加，而腸桿菌科數(shù)量顯著降低(P＜0.01)。此外，乳酸桿菌屬(P＜0.05)、雙歧桿菌屬(P＜0.0

7、5)和產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌(P＜0.05)數(shù)量僅在高劑量組顯著增加，低劑量組則無變化;盲腸中，L.buchneri添加組僅有腸桿菌科數(shù)量均顯著降低(P＜0.01)，而高劑量組中乳酸桿菌屬(P＜0.05)、溶纖維丁酸弧菌（P＜0.05）數(shù)量顯著增加，其它檢測菌屬無變化。此外，進(jìn)一步分析空腸、回腸和盲腸中E.coil,發(fā)現(xiàn)回腸和盲腸中布氏乳桿菌添加組E.coil數(shù)量顯著降低(P＜0.05)，空腸也有降低但差異不顯著（P＞0.05）。由此可見，L

8、.buchneri能夠提高腸道微生物豐富度，增加腸道中多種有益微生物數(shù)量，抑制部分有害菌增殖。
　　qPCR檢測腸道TLRs基因表達(dá)，L.buchneri添加組與對(duì)照組比較，各腸段中TLRs基因表達(dá)量均出現(xiàn)降低。L.buchneri添加組，空腸和盲腸TLR2和TLR4基因表達(dá)顯著降低（P＜0.01）;回腸TLR2和TLR4基因表達(dá)量，低劑量組均顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)，而高劑量組只有TLR4基因出現(xiàn)降低(P＜0.05)，TL

9、R2基因表達(dá)差異不顯著（P＞0.05），說明L.buchneri具有下調(diào)腸道TLR2和TLR4的能力。L.buchneri添加組外周血中TNF-α顯著升高(P＜0.01)，且高劑量組高于低劑量組(P＜0.05)。IL-4在低劑量組和高劑量組均出現(xiàn)降低(P＜0.05)，且高劑量組低于低劑量組(P＜0.05)。IL-1，IL-6和INF-γ高劑量組與對(duì)照組比較顯著降低(P＜0.05)，但低劑量組變化不顯著(P＞0.05)。IL-10和IL-

10、12也有一定的變化但差異不顯著（P＞0.05）。
　　結(jié)論:①獺兔腹瀉發(fā)生后盲腸有益微生物數(shù)量減少，有害細(xì)菌數(shù)量增加;腸道菌群結(jié)構(gòu)在一定程度上有復(fù)雜化的趨勢;②L.buchneri能夠增加腸道菌群豐富度，顯著增加有益微生物數(shù)量，抑制部分有害細(xì)菌增殖;L.buchner能夠提高腸道菌群B/F比例，適量添加L.buchneri有助于提高獺兔飼料利用率;L.buchner能夠下調(diào)腸道TLR2和TLR4基因表達(dá)，有助于提高腸道組織對(duì)正常菌