TLR2、TLR4在銅綠假單胞菌慢性肺部感染中的免疫損傷機(jī)制.pdf

1、目的:
　　銅綠假單胞菌是(Pseudomonas aeruginosa, PA)是一種臨床上常見(jiàn)的機(jī)會(huì)致病菌,也是肺部感染常見(jiàn)的病原菌。由于其極強(qiáng)的適應(yīng)能力和適時(shí)多變的毒力,常使得肺部炎癥遷延難易治愈。Toll樣受體(Toll like receptors TLRs)是一類病原模式識(shí)別受體(pattern recognition receptors,PRRs),可識(shí)別病原體相關(guān)分子模式(pathogen-associated m

2、olecular patterns,PAMPs),其中TLR2(Toll-like receptor2),TLR4(Toll-like receptor4)可識(shí)別革蘭陰性桿菌的特異成分脂多糖(lipoolysaccharide,LPS),但它們?cè)阢~綠假單胞菌慢性肺部感染的免疫損傷中機(jī)制并不明確。長(zhǎng)期低劑量大環(huán)內(nèi)酯類抗生素可改善PA慢性感染患者的肺功能和臨床癥狀,但其對(duì)PA慢性肺部感染后TLR2,TLR4的免疫機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。為此,本文將

3、擬從分子水平、細(xì)胞水平、器官水平研究Toll樣受體在PA慢性肺部感染中的免疫病理?yè)p傷機(jī)制,及低劑量阿奇霉素相關(guān)免疫機(jī)制調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　1. Balb/c小鼠隨機(jī)氣道接種含有銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)瓊脂糖珠(PA組)和無(wú)菌瓊脂糖珠(對(duì)照組)。于接種后第1、3、5、7、14天處死小鼠,行肺組織細(xì)菌培養(yǎng)、肺泡灌洗液白細(xì)胞計(jì)數(shù)和肺組織病理檢查,ELISA檢測(cè)肺泡灌洗液(broncho

4、alveolar lavage fluid,BALF)中白介素(interleukin, IL)-6和白介素(interleukin, IL)-17的含量,用real-time PCR檢測(cè)TLR2mRNA及TLR4的mRNA表達(dá)。探討 TLR2mRNA,TLR4mRNA在銅綠假單胞菌慢性感染小鼠肺內(nèi)的動(dòng)態(tài)改變及其作用。
　　2.采用氣道接種含銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginose PA)的瓊脂糖Balb/c小鼠

5、,感染后第7天起分別予低劑量阿奇霉素和生理鹽水治療,感染后第7、10、14天分別進(jìn)行支氣管肺泡灌洗液中的炎性因子IL-6和IL-17的ELISA檢測(cè)以及肺組織TLR4 mRNA表達(dá)水平的定量PCR分析,同時(shí)進(jìn)行肺組織細(xì)菌培養(yǎng)、肺泡灌洗液白細(xì)胞計(jì)數(shù)和肺組織病理檢查。接種無(wú)菌PA瓊脂糖的小鼠做空白對(duì)照組。分析低劑量阿奇霉素對(duì)感染銅綠假單胞菌小鼠的肺組織TLR4表達(dá)及相關(guān)炎癥因子的影響。
　　結(jié)果:
　　1. PA組在接種后第3天

6、IL-6和IL-17均達(dá)高峰,兩者在接種后第14天仍處于高水平。PA組中TLR4的mRNA相對(duì)表達(dá)第7天達(dá)高峰,第14天仍高于對(duì)照組。TLR2的mRNA在各時(shí)間點(diǎn)PA組和對(duì)照組相比變化均不明顯。
　　2. AZM組的小鼠在治療后肺部感染癥狀明顯改善。感染后第7天,感染PA小鼠肺組織病理?yè)p傷程度、細(xì)胞因子及 TLR4mRNA表達(dá)均高于對(duì)照組。感染后第10、14天,阿奇霉素組的小鼠IL-6、IL-17及TLR4mRNA的表達(dá)量顯著低于