IL-17、Il-27在大鼠銅綠假單胞菌肺部感染中的表達(dá)變化及機(jī)制探討.pdf

1、目的：建立大鼠銅綠假單胞菌(PA)肺部感染模型，動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞因子IL-17和IL-27在大鼠肺部銅綠假單胞菌感染中的變化，探索IL-17、IL-27在銅綠假單胞菌所致肺部感染中的可能作用。
　　方法：經(jīng)口腔直接氣管插管法建立銅綠假單胞菌大鼠肺部感染模型。實(shí)驗(yàn)組給予PA生理鹽水菌懸液(2×108cfu/ml)，對(duì)照組給予等體積的生理鹽水。分別于感染第0、1、4、7、11和15天利用血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi)；采用ELISA法檢

2、測(cè)血清中IL-17、IL-27的濃度變化；并于感染后第1和15天取肺組織蘇木精-伊紅(HE)染色和IL-17免疫組織化學(xué)染色，觀察大鼠肺組織的病理變化和IL-17細(xì)胞因子的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：PA感染組大鼠在注入菌懸液1天后出現(xiàn)感染癥狀，表現(xiàn)為呼吸急促、活動(dòng)明顯減少；大體上肺表面有斑片狀出血灶；顯微鏡下可見(jiàn)肺泡上皮受損，支氣管水腫、大量炎癥細(xì)胞和纖維蛋白滲出，肺泡壁出血，肺部組織表現(xiàn)為急性炎癥反應(yīng)。感染第15天肺臟表面可見(jiàn)陳舊性

3、出血灶；鏡下肺泡壁增厚，上皮細(xì)胞增生，淋巴細(xì)胞大量聚集，肺部組織表現(xiàn)為慢性炎癥反應(yīng)。大體觀察和鏡下病理均提示肺葉炎性病變，肺組織病理表現(xiàn)由急性炎癥反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)槁匝装Y反應(yīng)。
　　血細(xì)胞計(jì)數(shù)顯示，PA接種后感染組白細(xì)胞總數(shù)計(jì)數(shù)于感染后第1天表現(xiàn)為下降[(10.51±1.18)×109/L]，與第0天[(14.42±2.77)×109/L]比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；之后逐漸上升，至感染后第7天達(dá)峰值[(12.40±3.03)

4、×109/L]，與第11天[(9.36±1.05)×109/L]、第15天[(9.10±3.44)×109/L]兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，之后再次下降。中性粒細(xì)胞絕對(duì)值計(jì)數(shù)于感染后第1天達(dá)峰值[(3.81±0.84)×109/L]，之后逐漸下降，于第15天達(dá)最低值[(1.42±0.61)×109/L]。淋巴細(xì)胞絕對(duì)值計(jì)數(shù)第1天表現(xiàn)為下降[(6.00±1.53)×109/L]，與第0天[(10.44±2.40)109/L]

5、、第4天[(7.61±1.77)109/L]、第7天[(7.72±1.08)109/L]兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；而淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)于第4天上升后維持在一定水平，隨后幾天之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。白細(xì)胞分類(lèi)結(jié)果顯示，PA接種后第1天，感染組中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)達(dá)峰值，占白細(xì)胞總數(shù)(40.66±9.47)％，與其余各時(shí)間段兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；之后呈下降趨勢(shì)，其中第4天[(24.54±7.50)％]、第7天[(23.8

6、5±6.51)％]、第11天[(20.28±5.77)％]中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；第15天達(dá)最低值(15.46±4.08)％，與第1、4、7天兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)在感染第1天表現(xiàn)為最低值，占白細(xì)胞總數(shù)(51.29±9.42)％，與其余各時(shí)間段兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；之后呈逐漸上升趨勢(shì)，至第15天淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)達(dá)(78.76±3.19)％，與第1天[(

7、51.29±9.42)％]、第4天[(68.79±10.55)％]、第7天[(63.88±8.05)％]、第11天[(71.65±5.77)％]兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組接種前、后各階段白細(xì)胞總數(shù)、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、中性粒細(xì)胞絕對(duì)值、淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)均無(wú)明顯變化。
　　肺組織免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示，感染組大鼠無(wú)論在PA肺部感染的急性期還是慢性期肺組織均可見(jiàn)IL-17的高表達(dá)，表現(xiàn)為細(xì)胞漿呈

8、棕褐色。未感染組胞漿內(nèi)少見(jiàn)或無(wú)棕褐色反應(yīng)物。
　　血清細(xì)胞因子檢測(cè)結(jié)果顯示，血清中IL-17濃度在感染后第4天達(dá)高峰為(160.93±3.65)pg/L，分別與第0天[(138.37±13.63)pg/L、第1天[(140.67±11.98)pg/L、第7天[(117.55±12.61)pg/L、第15天[(119.16±12.30)pg/L]兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；第7天迅速下降為(117.55±12.61)p

9、g/L與第0、1、4、11[(147.70±0.98)pg/L]天兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；之后于第11天再次上升為(147.70±0.98)pg/L，與第7、15天兩兩比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而血清中IL-27濃度在感染組和對(duì)照組均未出現(xiàn)明顯變化，兩組IL-27不同時(shí)間點(diǎn)濃度值兩兩比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：經(jīng)大鼠口腔氣管插管滴注PA菌懸液成功建立了大鼠急慢性肺部感染模型。