OxLDL和oxHDL對ECV304內皮細胞TLR2和TLR4表達的影響及其對人單核細胞趨化作用的變化.pdf

1、研究背景: 大量證據證明動脈粥樣硬化是一種在發(fā)病起始和整個過程中都伴有免疫反應的炎癥性疾病。固有免疫反應是機體的第一道防線，它識別高度保守的病原相關分子模式。在這第一道防線中，識別病原相關分子模式的受體中主要有Toll樣受體和清道夫受體。研究表明，TLR2和TLR4在人的動脈粥樣硬化斑塊中的表達顯著提高。TLR2和TLR4在人動脈粥樣硬化病變中與炎癥的激活相關，他們促發(fā)了動脈粥樣硬化發(fā)病過程中的固有免疫反應。動脈粥樣硬化是以脂質

2、和炎癥細胞在血管壁的堆積為特點的。當循環(huán)中的脂蛋白堆積，聚集并在血管內膜下被修飾后，引起并推進動脈粥樣硬化的發(fā)展。這導致炎癥細胞的浸潤和巨噬細胞對脂質攝取的失調。研究表明TLR2和TLR4受到配體的刺激以后可以引發(fā)多種細胞因子和炎癥分子的合成和釋放，如MCP-1，IL-8，粘附分子等。其中有很多重要的分子與動脈粥樣硬化起始過程都是密切相關的。另外，在動脈粥樣硬化的發(fā)病機制當中，脂蛋白的作用已經比較明確，但是免疫反應在其中的作用仍然不清楚

3、。因此，本研究意在探討修飾的脂蛋白對內皮細胞TLR2和TLR4表達的影響，以及內皮細胞TLR2和TLR4對單核細胞趨化的影響。 目的: 觀察oxLDL，oxHDL對ECV304人臍靜脈內皮細胞膜上TLR2、TLR4受體表達的影響，以及人臍靜脈內皮細胞TLR2、TLR4受到這兩種脂蛋白刺激后對THP-1趨化作用的改變。 方法: 每次實驗前24小時，給ECV304內皮細胞換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)后加處理因素。用不同濃

4、度（0 mg/L，25 mg/L，50 mg/L，100 mg/L）的oxLDL和oxHDL孵育ECV304內皮細胞24小時后，用RT-PCR的方法檢測細胞TLR2和TLR4 mRNA表達的水平，篩選出最適的處理濃度。用該濃度處理ECV304內皮細胞24小時后，用RT-PCR的方法檢測細胞TLR2和TLR4 mRNA表達的水平，用Western blot 的方法檢測TLR2和TLR4蛋白表達水平。將ECV304內皮細胞種于Transwe

5、ll下室后，用最適濃度的oxLDL和oxHDL處理內皮細胞24小時，然后在上室種THP-1單核細胞，計數下室的THP-1單核細胞。將ECV304內皮細胞種于Transwell下室后，用最適濃度的oxLDL和oxHDL處理內皮細胞24小時，用5μmol/LEGCG孵育內皮細胞1小時，抑制其TLRs信號后，再將THP-1細胞種到上室然后，計數下室的THP-1單核細胞，觀察THP-1單核細胞趨化的情況。 結果: 用不同濃度的（

6、0 mg/L，25 mg/L，50 mg/L，100 mg/L）的oxLDL和oxHDL孵育ECV304內皮細胞24小時后，ECV304內皮細胞上TLR2和TLR4 mRNA表達隨處理濃度的升高增強。在100 mg/L oxLDL和100 mg/L oxHDL的作用下，ECV304內皮細胞上TLR2和TLR4 mRNA和蛋白表達水平明顯上調。將ECV304內皮細胞種植到transwell下室并用oxLDL和oxHDL處理細胞后， ECV

7、304內皮細胞對THP-1單核細胞的趨化作用明顯增強。當用5μmol/L EGCG抑制TLRs信號途徑后，內皮細胞對THP-1單核細胞的這種趨化作用卻明顯減弱。 結論: （1）在人ECV304內皮細胞上存在有TLR2和TLR4基因的表達； （2）oxLDL和oxHDL可以上調ECV304內皮細胞TLR2和TLR4的mRNA和蛋白質的表達； （3）oxLDL和oxHDL刺激ECV304內皮細胞上TLR2和T