潔澤1號對陰道上皮細胞與白色念珠菌粘附率及天然免疫因子TLR4和NF-κB表達的影響.pdf

1、第一部分:
　　 目的：
　　 觀察中藥復(fù)方潔澤1號對白色念珠菌與人陰道上皮細胞粘附率的影響。進一步明確潔澤1號防治外陰陰道假絲酵母菌病可能的作用機制。
　　 方法：
　　 設(shè)置模型組、12.5mg/ml潔澤1號組、5umol/L小檗堿組、3mg/ml甘露聚糖組和5mmol/L高碘酸組。將人陰道上皮細胞（VK2/E6E7）以不同藥物的處理相應(yīng)時間，即潔澤1號與細胞共孵育72小時、小檗堿與細胞共孵育48小時

2、、甘露聚糖與細胞共孵育2小時、高碘酸與細胞共孵育10分鐘后，給予已標(biāo)記FITC的白色念珠菌室溫下避光搖床共孵育2小時。MTT法檢測潔澤1號及小檗堿的藥物細胞毒性、流式細胞術(shù)檢測白色念珠菌與陰道上皮細胞的粘附率。
　　 結(jié)果：
　　 1、潔澤1號、小檗堿對VK2/E6E7細胞的藥物毒性：
　　 MTT法檢測藥物的細胞毒性，結(jié)果：潔澤1號對VK2/E6E7細胞的IC50為100.8279mg/ml，IC20為36.

3、0579mg/ml。小檗堿對VK2/E6E7細胞的IC50為21.2164umol/L，IC2010.696umol/L。
　　 2、潔澤1號對白色念珠菌與上皮細胞粘附率的影響：
　　 陰道上皮細胞與白色念珠菌孵育2小時后，流式細胞術(shù)檢測法檢測白色念珠菌與VK2/E6E7細胞的粘附率：模型組粘附率為(24.5768+1.575)％；甘露聚糖組粘附率為(7.2167+0.3667)％；高碘酸組粘附率為(22.7767+2

4、.3034)％，；潔澤1號粘附率為(11.05+0.3897)％，小檗堿組粘附率為(12.4667+1.266)％。潔澤1號組、小檗堿組較模型組VK2/E6E7細胞與白念菌粘附率下降，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），較甘露糖組粘附率增高，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），甘露糖組較模型組粘附率下降，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.01），高碘酸組較模型組結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)意義（p>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 中藥復(fù)方潔澤1號

5、能減少白色念珠菌與宿主細胞，即VK2/E6E7的粘附，增強陰道上皮細胞抵抗念珠菌入侵的能力。
　　 第二部分:
　　 目的：
　　 研究潔澤1號對經(jīng)白色念珠菌刺激后的陰道上皮細胞，其天然免疫因子TLR4及NF-κB表達的影響，探討潔澤1號對人陰道上皮細胞抗白色念珠菌感染的部分天然免疫機制。
　　 方法：
　　 設(shè)置空白對照組、模型組、12.5mg/ml潔澤1號組、5umol/L小檗堿組、3mg/m

6、l甘露聚糖組和5mmol/L高碘酸組。將人陰道上皮細胞與白色念珠菌熱滅活孢子37℃共培養(yǎng)12小時后，與藥物共孵育相應(yīng)時間。免疫熒光技術(shù)觀察TLR4在胞漿的表達時間以及NF-κB由胞漿進入胞核的時間，Western-blotting技術(shù)檢測經(jīng)白色念珠菌刺激后陰道上皮細胞TLR4的表達及NF-κB在細胞核內(nèi)的表達。
　　 結(jié)果：
　　 1、 TLR4在細胞漿及NF-κB由胞漿進入胞核的時序變化予白色念珠菌熱滅活孢子與陰道上

7、皮細胞37℃共培養(yǎng)，激光共聚焦顯微鏡觀察可見：共培養(yǎng)2小時后，TLR4開始表達，4小時、6小時后TLR4表達逐漸增多，12小時表達達到高峰，24小時表達開始回落。NF-κB亦以同樣的時間趨勢進入細胞核內(nèi)。即白色念珠菌與細胞共培養(yǎng)12小時為TLR4與NF-κB的表達高峰的時相。
　　 2、 白色念珠菌刺激后各組VK2/E6E7細胞TLR4及NF-κB的表達在TLR4的表達上，模型組與正常組相比，TLR4表達增多，結(jié)果有極顯著統(tǒng)計

8、學(xué)意義（P<0.01）。甘露聚糖組與模型組相比，TLR4表達無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；潔澤1號組、小檗堿組、高碘酸組較模型組減少，均有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。
　　 在NF-κB的表達上，模型組與正常組相比，NF-κB表達增多，結(jié)果有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。高碘酸組、潔澤1號組、小檗堿較模型組NF-κB表達減少，結(jié)果均有極顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；甘露糖組較模型組NF-κB表達增多，其結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意