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文檔簡介
1、背景與目的:
目前臨床上救治危重患者的重要措施之一是機(jī)械通氣(mechanical ventilation,MV),及早對患者進(jìn)行機(jī)械通氣不但可以糾正難治性低氧血癥,而且對防治肺泡塌陷以及對抗肺水腫也具有重要作用。但是機(jī)械通氣也伴隨著許多并發(fā)癥,如機(jī)械通氣相關(guān)性肺損傷(ventilation-induced lung injury,VILI),目前越來越多的研究人員對此并發(fā)癥高度關(guān)注。參與VILI的細(xì)胞種類有不少,研究較多
2、的有中性粒細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞等,而目前的研究熱點(diǎn)是VILI中肺泡巨噬細(xì)胞(Alveolar macrophages,AM)所產(chǎn)生的作用。有研究發(fā)現(xiàn),在生理情況下AM分泌的細(xì)胞因子的種類和數(shù)量都十分有限,但在潮氣量通過機(jī)械牽張導(dǎo)致肺損傷(即傷害性機(jī)械通氣)的病理情況下,AM活化后可分泌大量的炎性細(xì)胞因子、趨化因子、炎性介質(zhì)等多種生物活性物質(zhì)而導(dǎo)致肺損傷。本文中研究的TLR4便是主要存在于哺乳動物肺臟的巨噬細(xì)胞表面,它是T
3、oll樣受體家族的成員之一,是重要的固有免疫分子。由于在體實(shí)驗(yàn)受神經(jīng)體液等多種因素的調(diào)節(jié),單純的機(jī)械牽張對大鼠肺泡巨噬細(xì)胞上TLR4受體的影響尚不是很清楚。我們的實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟谔接憴C(jī)械牽張對大鼠AM Toll樣受體4(TLR4)表達(dá)的影響。
方法:用預(yù)冷的無菌的PBS-H(10%小牛血清的PBS和含10U/ml肝素)對大鼠進(jìn)行支氣管肺泡充分灌洗,然后將肺泡灌洗液中的AM進(jìn)行分離和純化,最后收集的貼壁細(xì)胞便是AM。本實(shí)驗(yàn)將培養(yǎng)
4、后的AM隨機(jī)分為3組(n=6):機(jī)械牽張6h組、機(jī)械牽張8h組和靜止對照組。機(jī)械牽張組細(xì)胞采用美國Flexercell公司生產(chǎn)的Flexercell4000TTM應(yīng)力加載系統(tǒng),施加的牽張力大小為能夠使變形膜拉伸30%,牽張頻率為30次/min,牽拉∶松弛=1∶1,牽張時間分別為6h和8h。靜止對照組細(xì)胞除了未施加周期性牽張外,其余條件均同牽張8h組。逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(reverse transcriptase PCR,RT-PCR)檢測A
5、M上的TLR4 mRNA的表達(dá);ELISA檢測巨噬細(xì)胞炎性蛋白2(macrophage inflammatory protein2,MIP-2)的濃度;免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測AM上TLR4蛋白的表達(dá)。最后的數(shù)據(jù)用統(tǒng)計學(xué)進(jìn)行處理。
結(jié)果:AM的TLR4 RT-PCR結(jié)果用TLR4 mRNA/ACTINmRNA的OD比值表示,與對照組比,機(jī)械牽張組TLR4mRNA條的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),機(jī)械牽張6h組與8h組表達(dá)
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