機(jī)械預(yù)牽張對(duì)過(guò)度機(jī)械牽張所致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞HMGB1表達(dá)的影響.pdf

1、第一部分:機(jī)械預(yù)牽張可以抑制過(guò)度機(jī)械牽張所致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞HMGB1的表達(dá)
　　目的:探討機(jī)械預(yù)牽張對(duì)過(guò)度機(jī)械牽張(Cyclic stretch，CS)所致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞晚期炎性介質(zhì)高遷移率族蛋白1(High mobility group box1， HMGB1)表達(dá)的影響。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)以肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞株（A549細(xì)胞）作為研究對(duì)象，采用Flexercell-4000作為細(xì)胞周期性機(jī)械牽張動(dòng)力。實(shí)驗(yàn)分為6組:對(duì)照

2、組（Ⅰ組）:常規(guī)培養(yǎng)，未進(jìn)行機(jī)械牽張;機(jī)械牽張組（Ⅱ組）:給予A549細(xì)胞20％ CS6 h;15 min預(yù)牽張組（Ⅲ組）:給予5％ CS15 min后，隨后給予20％ CS6 h;30 min預(yù)牽張組（Ⅳ組）:給予5％ CS30min后，隨后給予20％ CS6 h;;60 min預(yù)牽張組（Ⅴ組）:給予5％ CS60min后，隨后給予20％ CS6 h;120min預(yù)牽張組（Ⅵ組）:給予5％CS120 min后，隨后給予20％CS6h。

3、所有細(xì)胞均用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)測(cè)定晚期炎性介質(zhì)HMGB1表達(dá);RT-PCR法測(cè)定HMGB1 mRNA及HMGB1受體mRNA表達(dá);Western Blot法測(cè)定轉(zhuǎn)錄激活因子3(Signal transducer and activator oftranscription3，STAT3)磷酸化情況。
　　結(jié)果:與Ⅰ組比較，Ⅱ組A549細(xì)胞給予20％機(jī)械

4、牽張6h后晚期炎性介質(zhì)HMGB1表達(dá)、HMGB1 mRNA表達(dá)、HMGB1受體mRNA及STAT3磷酸化水平明顯增加(P＜0.05)。與Ⅱ組比較，機(jī)械預(yù)牽張30、60、120 min時(shí)HMGB1表達(dá)、HMGB1 mRNA表達(dá)及STAT3磷酸化水平明顯明顯降低(P＜0.05)，尤以預(yù)處理60 min時(shí)效果最優(yōu)（P＜0.05）;HMGB1受體mRNA表達(dá)無(wú)明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論:機(jī)械預(yù)牽張可以抑制過(guò)度機(jī)械牽張所致的肺泡Ⅱ

5、型上皮細(xì)胞晚期炎性介質(zhì)HMGB1的表達(dá)，其機(jī)制與抑制STAT3磷酸化有關(guān)。
　　第二部分:機(jī)械預(yù)牽張通過(guò)抑制SOCS3/STAT3通路激活減少過(guò)度機(jī)械牽張所致HMGB1表達(dá)
　　目的:探討細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白3(Suppressor of cytokine signaling3，SOCS3)/STAT3信號(hào)通路在機(jī)械預(yù)牽張抑制機(jī)械牽張所致肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞HMGB1表達(dá)中的作用。
　　方法:第一部分:A549細(xì)胞分為

6、5組，Control組（未轉(zhuǎn)染）;negative組(轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA);siRNA-SOCS3-1組(轉(zhuǎn)染siRNA-SOCS3-1); siRNA-SOCS3-2組(轉(zhuǎn)染siRNA-SOCS3-2);siRNA-SOCS3-3組(轉(zhuǎn)siRNA-SOCS3-3)。RT-PCR法測(cè)定HMGB1mRNA表達(dá)。
　　第二部分:A549細(xì)胞分為4組，20％ CS組(予以A549細(xì)胞20％ CS6 h);20％ CS+5％CS+SO

7、CS3 siRNA組(SOCS3 siRNA轉(zhuǎn)染后，給予A549細(xì)胞5％ CS60 min，隨后給予A549細(xì)胞20％ CS6 h);20％ CS+5％ CS組(給予A549細(xì)胞5％ CS60 min，隨后給予給予A549細(xì)胞20％ CS6 h);20％ CS+5％ CS+negative-siRNA組(negative-siRNA轉(zhuǎn)染后，給予A549細(xì)胞5％ CS60 min，隨后給予A549細(xì)胞20％ CS6 h)。所有細(xì)胞均用EL

8、ISA法測(cè)定晚期炎性介質(zhì)HMGB1表達(dá);RT-PCR法測(cè)定HMGB1 mRNA表達(dá);Western Blot法測(cè)定STAT3磷酸化情況。
　　結(jié)果:第一部分:與Control組比較，SOCS3 siRNA-1，SOCS3 siRNA-2及SOCS3 siRNA-3組轉(zhuǎn)染后的SOCS3 mRNA表達(dá)量均明顯降低（P＜0.05）。其中，SOCS3 siRNA-2組的mRNA表達(dá)量最低（P＜0.05）。第二部分:與20％ CS組比較，5

9、％ CS+20％ CS組HMGB1表達(dá)、HMGB1 mRNA表達(dá)及STAT3磷酸化均明顯降低(P＜0.05)。與5％ CS+20％ CS組相比，5％ CS+20％ CS+SOCS3 siRN組HMGB1表達(dá)、HMGB1 mRNA表達(dá)及STAT3磷酸化均明顯增加（P＜0.05），5％ CS+20％ CS+ negative-siRNA組HMGB1表達(dá)、HMGB1 mRNA表達(dá)及STAT3磷酸化均無(wú)明顯變化(P＞0.05)。
　　結(jié)論