消退素D1對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞EMT的影響.pdf

1、目的:
　　上皮細(xì)胞一間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是指完全分化的上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)表型轉(zhuǎn)化，獲得間質(zhì)細(xì)胞特征的生物學(xué)過(guò)程。越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)，EMT可能是組織器官纖維化的一個(gè)重要原因。受損的肺泡上皮細(xì)胞發(fā)生EMT，轉(zhuǎn)化為成纖維細(xì)胞和肌成纖維細(xì)胞，與肺纖維化有密切的關(guān)系。促炎癥消退介質(zhì)消退素D1具有抗炎促消退的作用。最新的研究表明，消退素D1在腫瘤細(xì)胞的EMT過(guò)程中具有一定的抑

2、制作用。然而對(duì)于各種誘因引起的肺泡上皮細(xì)胞EMT發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，消退素D1是否同樣具有干預(yù)作用缺乏相應(yīng)的研究。因此，本研究的目的是通過(guò)建立TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞EMT模型，探討消退素D1對(duì)此生物學(xué)過(guò)程是否具有干預(yù)作用。
　　方法:
　　1.用胰酶消化、免疫和差時(shí)貼壁法分離純化SD大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞。
　　2.將培養(yǎng)48小時(shí)后的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞隨機(jī)分成4組:①正常對(duì)照組(control，培養(yǎng)基不加任

3、何藥物)，②TGF-β1組(TGF-β1，10ng/ml)，③TGF-β1+RvD1組（10ng/ml TGF-β1+100nmol/ml resolvinD1）④溶劑對(duì)照組(10ng/ml TGF-β1+0.19 ul/ml alcohol)。
　　3.藥物作用72小時(shí)后，顯微鏡下觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞形態(tài)的改變。
　　4.用蛋白印跡法(western blot)檢測(cè)藥物作用72h前后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cad

4、herin，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志α-SMA蛋白的表達(dá)。
　　5.CCK-8檢測(cè)藥物作用72h后各組細(xì)胞的增殖情況。
　　6.采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，兩兩比較采用Newmankeuls檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.顯微鏡下觀察藥物處理72h后肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變:正常對(duì)照組

5、細(xì)胞呈鵝卵石狀，細(xì)胞連接成片，胞漿內(nèi)可看到顆粒狀物;TGF-β1組細(xì)胞形態(tài)梭形樣改變，與成纖維細(xì)胞相似，細(xì)胞與細(xì)胞連接變得松散，幾乎見(jiàn)不到正常的細(xì)胞形態(tài);TGF-β1+RvD1組出現(xiàn)梭形細(xì)胞與正常細(xì)胞共存狀態(tài)，且梭形細(xì)胞形態(tài)有所改善，細(xì)胞連接較緊密，可見(jiàn)正常細(xì)胞形態(tài);TGF-β1+alcohol組細(xì)胞形態(tài)與TGF-β1組相似。
　　2.肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞E-cadherin蛋白表達(dá)量:與正常對(duì)照組相比，TGF-β1組與溶劑對(duì)照組E-

6、cadherin蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05);與TGF-β1組相比，TGF-β1+RvD1組E-cadherin蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05)。
　　3.肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)量:與正常對(duì)照組相比，TGF-β1組與溶劑對(duì)照組α-SMA蛋白表達(dá)明顯升高(P＜0.05);與TGF-β1組相比，TGF-β1+RvD1組α-SMA蛋白表達(dá)明顯降低(P＜0.05)。
　　4.藥物作用72h后，各組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞增殖

7、情況比較:與正常對(duì)照組相比，其他三組均無(wú)明顯增殖情況;四組細(xì)胞的增殖情況差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.TGF-β1在一定條件下，可使正常分化的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞發(fā)生EMT。
　　2.RvD1可改善TGF-β1引起的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞向梭形細(xì)胞轉(zhuǎn)化的程度，在一定程度上保持細(xì)胞間的緊密連接。
　　3.在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞發(fā)生的EMT中，RvD1可上調(diào)TGF-β1引起的上皮細(xì)胞標(biāo)志E-cadherin蛋白表達(dá)量的降