探討香煙煙霧提取物導致鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞周期變化中TGF-β1的作用.pdf

1、目的：
　　觀察香煙煙霧提取物（Cigarettesmokeextract，CSE）是否導致大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞（RatalveolarTypeIIepithelialcell，RLE-6TN）細胞周期的改變以及在這其中轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1）是否有發(fā)揮作用。
　　方法：
　　選用健康清潔級SD雄性大鼠8只（重量：180～220g），完全隨機平均分配為對照

2、組、煙熏組，每組4只，給予煙熏組大鼠暴露于香煙煙霧中每天6小時連續(xù)3天，于第4天處死動物后取肺組織，進行石蠟包埋切片后，HE染色觀察結(jié)構(gòu)改變，免疫組化法測定CyclinD1的表達情況。體外培養(yǎng)的大鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞，除對照組外，其余各組分別予0.25％、0.5%、1%濃度的CSE刺激48h。TGF-β1受體抑制劑（SB431542）預處理細胞6h，實驗設計為對照組、1%CSE組、SB431542組、1%CSE+SB431542組，CSE

3、刺激48h。各組細胞于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后收集細胞，分別采用流式細胞儀檢測細胞周期，ELISA、Westernblot法測定TGF-β1、CyclinD1蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：
　　煙熏組大鼠肺組織發(fā)生形態(tài)學及病理學的改變，TGF-β1表達增加、CyclinD1表達抑制（與對照組比較）。CSE暴露干預細胞后，G1期細胞的比例呈濃度依賴性與時間依賴性的增高，同時TGF-β1表達增加、CyclinD1表達