機(jī)械牽張刺激下大鼠皮膚再生的關(guān)鍵基因篩選.pdf

1、目的：明確機(jī)械牽張刺激下大鼠皮膚再生相關(guān)基因表達(dá)譜的變化，并篩選出其中的關(guān)鍵基因。
　　方法：建立大鼠皮膚擴(kuò)張模型，以未擴(kuò)張皮膚為對(duì)照，以注水量不同分組取材。分別是：對(duì)照組（ctrl）、擴(kuò)張器最終注水60ml組（exp60）、擴(kuò)張器最終注水120 ml組（exp120）、擴(kuò)張器最終注水180 ml組（exp180）。取材后一部分樣本切片做免疫熒光染色，熒光標(biāo)記增殖標(biāo)記物Ki67，繪制皮膚細(xì)胞增殖曲線。另一部分樣本做基因芯片，檢測(cè)m

2、RNA表達(dá)譜的變化并利用t檢驗(yàn)和差異表達(dá)的倍數(shù)變化（FC值）篩選出關(guān)鍵基因。篩選出皮膚再生的關(guān)鍵基因后，用PCR方法驗(yàn)證以確認(rèn)該基因的表達(dá)量及其與皮膚增殖之間的關(guān)系。
　　結(jié)果：免疫熒光染色顯示，增殖標(biāo)記物Ki67在各組的表達(dá)量由低到高依次是：ctrl、exp180、exp60、exp120。本研究篩選出不同機(jī)械牽張刺激下大鼠皮膚再生的11個(gè)差異基因，分別為：Myh1、Myh2、Myh3、Myh4、Car6、Pi15、Apt12a

3、、Mt1a、Cthrc1、Rsad2、IGF-BP5。其中IGF-BP5(重組人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-5）和對(duì)照組的皮膚內(nèi)表達(dá)相比為下調(diào)基因，PCR驗(yàn)證得出，IGF-BP5在各組的表達(dá)量由低到高依次是：exp120、exp60、exp180、ctrl。
　　結(jié)論：機(jī)械牽張刺激下，隨著擴(kuò)張時(shí)間及量的增加，大鼠皮膚再生呈現(xiàn)早期細(xì)胞增殖加速，中期增殖活躍，后期增殖減緩的趨勢(shì)；且IGF-BP5可能為影響機(jī)械牽張刺激下大鼠皮膚再生的關(guān)鍵