機械牽張預(yù)處理對過度牽張所致的肺泡上皮細胞損傷的影響及相關(guān)機制的研究.pdf

1、第一部分:過度機械牽張對肺泡上皮細胞凋亡及細胞骨架的影響
　　目的:探討過度機械牽張對肺泡上皮細胞凋亡及細胞骨架的影響，闡明其相關(guān)機制。
　　方法:A549細胞株培養(yǎng)鑒定后分組，每組5份，施以相應(yīng)的處理。實驗分為空白對照組（C組）和過度牽張組（S組），S組:予以A549細胞20％的機械牽張2h、4h、6h和8h，分別記為S2組、S4組、S6組和S8組。收集細胞并測定下列指標:流式細胞儀檢測細胞凋亡;熒光顯微鏡下觀察F-act

2、in改變;RT-PCR測定RhoA和RacmRNA表達。
　　結(jié)果:與C組比較，S組隨牽張時間延長凋亡率增加(P＜0.05)。F-actin染色結(jié)果顯示:與C組比較，隨著過度牽張時間的延長細胞骨架破壞加重，S8組尤為明顯。RT-PCR檢測結(jié)果顯示:與C組比較，Rac mRNA表達進行性降低(P＜0.01); RhoA mRNA表達在6h、8h升高，6h時達峰值。
　　結(jié)論:隨著過度牽張時間的延長，細胞凋亡增加，細胞骨架破壞明

3、顯，其機制可能與上調(diào)RhoA mRNA表達、抑制Rac mRNA表達密切相關(guān)。
　　第二部分:機械牽張預(yù)處理對過度牽張所致肺泡上皮細胞損傷的影響及相關(guān)機制的研究
　　目的:探討機械牽張預(yù)處理對過度牽張所致肺泡上皮細胞凋亡及細胞骨架的影響，闡明其可能的相關(guān)機制。
　　方法:A549細胞株培養(yǎng)鑒定后分組，每組5份，施以相應(yīng)的處理。實驗分為對照組（C組）、過度牽張6h組（S6組）和預(yù)牽張組（P-S組），S6組:予以上皮細胞2

4、0％的機械牽張6h，記為S6組;P-S組:預(yù)先給予5％機械牽張15min、30min、60min、120min之后將牽張幅度調(diào)整為20％牽張6h，記為P15-S6組、P30-S6組、P60-S6組和P120-S6組。所有組別均行流式細胞儀檢測細胞凋亡;熒光顯微鏡下觀察F-actin改變;RT-PCR測定RhoA和Rac mRNA表達。
　　結(jié)果:與S6組比較，預(yù)處理30、60、120min時P-S6組細胞凋亡率下降(P＜0.05)

5、，預(yù)牽張60min時細胞凋亡率最低。F-actin染色結(jié)果顯示:與S6組比較，P-S6組肌絲重排、斷裂減輕，周邊肌動蛋白絲帶清晰，以預(yù)牽張60min時更優(yōu)。RT-PCR檢測結(jié)果顯示:與S6組比較，P-S6組RhoA mRNA表達均明顯下降(P＜0.01); Rac-1mRNA表達僅在預(yù)處理30、60min時差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:給予5％機械牽張預(yù)處理可通過抑制RhoA mRNA表達而上調(diào)Rac-1 mRNA