缺氧后處理影響肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞死亡受體途徑凋亡機(jī)制的研究.pdf

1、目的：探討缺氧后處理影響肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞死亡受體途徑凋亡的機(jī)制，為研究急性肺損傷保護(hù)措施提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：將傳3代的人肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞系(A549細(xì)胞)隨機(jī)分成3組，每組6個(gè)標(biāo)本，分別為常氧(Normoxia)組、缺氧復(fù)氧(H/R)組和缺氧后處理(H-PostC)組。①Normoxia組(37℃，5％CO2，95％air)在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h；②H/R組缺氧(37℃，5％CO2，95％N2)12h后再?gòu)?fù)氧(37℃，

2、5％CO2，95％air)12h；③H-PostC組缺氧(37℃，5％CO2，95％N2)12h后給予重復(fù)三次的5min復(fù)氧/5min缺氧的后處理，繼以恢復(fù)氧供(5％CO2，95％air)12h。實(shí)驗(yàn)前后在倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變；利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組A549細(xì)胞的凋亡率；RT-PCR檢測(cè)caspase8、Fas和FasL基因的表達(dá)量。
　　 結(jié)果：①細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化：Normoxia組：可見(jiàn)細(xì)胞成梭型，胞體明亮呈

3、完整，緊貼瓶底，無(wú)懸浮細(xì)胞；H/R組：細(xì)胞胞體變圓、變暗，在培養(yǎng)上清液中可見(jiàn)大量漂浮的細(xì)胞碎片，并可見(jiàn)大量的空泡狀細(xì)胞；H-PostC組：少部分細(xì)胞胞體變圓，細(xì)胞間隙稍增寬，有少量的懸浮的細(xì)胞碎片。②細(xì)胞凋亡率(％)：三組間檢測(cè)指標(biāo)比較，差異均有顯著性(p<0.05)；與Normoxia組比較，H/R組和H-PostC組明顯升高(p<0.05)；而H-PostC組則明顯低于H/R組(p<0.05)。③caspase8基因的表達(dá)：三組間比

4、較，差異均有顯著性(p<0.05)；與Normoxia組比較，H/R組和H-PostC組明顯升高(p<0.05)；而H-PostC組則明顯低于H/R組(p<0.05)。④Fas基因的表達(dá)：三組間比較，差異均有顯著性(p<0.05)；與Normoxia組比較，H/R組和H-PostC組明顯升高(p<0.05)；而H-PostC組則明顯低于H/R組(p<0.05)。⑤FasL基因的表達(dá)：三組間比較，差異均顯著(p<0.05)，與Normox