基因活性真皮替代物的構(gòu)建及其用于皮膚再生的研究.pdf

1、本文將基因治療與組織工程支架相結(jié)合，構(gòu)建了基因活性支架。首先，合成了陽(yáng)離子基因載體N-三甲基殼聚糖(TMC)，TMC可以通過(guò)靜電作用壓縮DNA形成納米復(fù)合粒子。將TMC/DNA復(fù)合粒子通過(guò)物理吸附的方法負(fù)載到膠原-殼聚糖支架上，發(fā)現(xiàn)TMC/DNA微粒在支架中有一定的緩釋能力。釋放出來(lái)的TMC/DNA微粒中的DNA有超螺旋結(jié)構(gòu)的存在，且具有較高的細(xì)胞轉(zhuǎn)染能力。將TMC/pDNA-VEGF微粒負(fù)載到支架上制備了基因活性支架，體外實(shí)驗(yàn)表明：基

2、因活性支架具有較高的細(xì)胞活性，HUVECs可以在支架上保持細(xì)胞的表型，支架上的TMC/pDNA-VEGF微粒具有較高的轉(zhuǎn)染效率，可以轉(zhuǎn)染細(xì)胞，分泌更多的VEGF。
　　 在本課題組前期的研究工作中，制備了膠原-殼聚糖/硅膠膜雙層人工真皮替代物(BDEs)。為了增強(qiáng)人工真皮替代物的血管化能力，將TMC/pDNA-VEGF微粒負(fù)載到空白人工真皮替代物上，制備了基因活性人工真皮替代物(gene-activated BDEs)。豬創(chuàng)傷全

3、層皮膚缺損的修復(fù)結(jié)果表明：術(shù)后7天、10天和14天，基因活性真皮替代物處理的創(chuàng)面具有最高的新生血管數(shù)和成熟血管數(shù)。PCR結(jié)果證實(shí)TMC/pDNA-VEGF微?？梢杂行мD(zhuǎn)染細(xì)胞，表達(dá)VEGF。基因活性真皮替代物處理10天的創(chuàng)面，即可進(jìn)行二次移植。超薄皮片移植112天后，創(chuàng)面破裂強(qiáng)度可以達(dá)到正常皮膚的80％。愈合的全層皮膚表皮層和真皮層連接緊密，乳頭層分化較好，膠原束和正常皮膚的結(jié)構(gòu)相似。
　　 同時(shí)探討了基因活性人工真皮替代物的使

4、用在真皮修復(fù)過(guò)程中對(duì)相關(guān)因子的影響及其可能的修復(fù)機(jī)理。TMC/pDNA-VGF微粒在體內(nèi)可以實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)達(dá)70天的細(xì)胞轉(zhuǎn)染、表達(dá)?；蚧钚匀斯ふ嫫ぬ娲锾幚淼膭?chuàng)面具有最高的VEGF和TGF-β3 mRNA的表達(dá)水平，而TGF-βi mRNA的表達(dá)水平較低，可以減少創(chuàng)面愈合后疤痕組織的產(chǎn)生。愈合后的創(chuàng)面真皮、表皮連接緊密，乳頭層分化較好。空白真皮替代物處理的創(chuàng)面愈合結(jié)果優(yōu)于凡士林紗布處理的創(chuàng)面。
　　 燒傷創(chuàng)面是個(gè)動(dòng)態(tài)創(chuàng)面，會(huì)隨著時(shí)間的

5、增加而加深，其修復(fù)比創(chuàng)傷創(chuàng)面要困難很多。將基因活性人工真皮替代物用于燒傷全層皮膚缺損的修復(fù)，結(jié)果表明：術(shù)后7天、14天和21天，基因活性真皮替代物處理的創(chuàng)面具有最高的新生血管數(shù)和成熟血管數(shù)，說(shuō)明真皮替代物的血管化明顯增強(qiáng)?；蚧钚哉嫫ぬ娲锾幚淼臒齻麆?chuàng)面，14天即可進(jìn)行二次移植。超薄皮片移植105天后，創(chuàng)面的破裂強(qiáng)度可以達(dá)到正常皮膚的70％。愈合的全層皮膚表皮層和真皮層連接緊密，乳頭層分化較好。
　　 將空白真皮替代物和基因活性