脫細胞SIS作為真皮替代物的實驗研究.pdf

1、目的:探討脫細胞SIS作為真皮替代物的可行性。 方法: 1、取自健康家豬的空腸，去除漿膜、肌層和黏膜，并采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL聯(lián)合脫細胞的方法處理制備脫細胞SIS。對其理化性能、組織學(xué)結(jié)構(gòu)及微生物學(xué)進行檢測。 2、實驗室內(nèi)以脫細胞SIS為真皮支架與人表皮細胞復(fù)合培養(yǎng)構(gòu)建復(fù)合皮。通過MTT檢測、組織學(xué)觀察、免疫組化檢測及掃描電鏡觀察，了解細胞生長情況及復(fù)合皮結(jié)構(gòu)。 3、SD大鼠背部形成全層皮膚缺損

2、創(chuàng)面。實驗組用脫細胞SIS作為真皮替代物與SD大鼠自體刃厚皮片進行復(fù)合移植修復(fù)創(chuàng)面；對照組單純以自體刃厚皮片進行移植修復(fù)創(chuàng)面。觀察兩組創(chuàng)面愈合的質(zhì)量及組織學(xué)變化。 結(jié)果： 1、脫細胞SIS厚度約0.1cm，為半透明狀、黃白色、質(zhì)地柔軟、彈性好的膜狀結(jié)構(gòu)。脫細胞SIS內(nèi)無細胞，具有多空隙的三維網(wǎng)狀空間結(jié)構(gòu)。微生物學(xué)檢測無微生物污染。 2、人表皮細胞在脫細胞SIS上能黏附、生長，MTT法檢測結(jié)果，復(fù)合培養(yǎng)組與單純?nèi)吮?/p>

3、皮細胞培養(yǎng)組在各時間點的A570值(OD值)無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。說明脫細胞SIS對人表皮細胞增殖無促進作用，但也無毒性作用，生物相容性好。HE染色和Masson染色組織學(xué)觀察，可見脫細胞SIS呈膠原網(wǎng)狀纖維結(jié)構(gòu)，其內(nèi)無細胞結(jié)構(gòu)，脫細胞SIS表面有一層細胞結(jié)構(gòu)。角蛋白免疫組化檢測證實脫細胞SIS表面生長的細胞是表皮細胞。掃描電鏡下可見脫細胞SIS上表皮細胞融合生長，透過細胞間隙可見其下的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的脫細胞SIS。 3、于術(shù)

4、后2、4、6周動態(tài)觀察，實驗組與對照組移植后均獲得了滿意的皮片成活率，兩組移植皮片在各時間點的成活率對比無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后4周及6周，與單純自體刃厚皮移植對照組比較，復(fù)合皮組植皮區(qū)收縮率均明顯減少，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)合皮組HE染色和Masson染色組織學(xué)觀察可見，術(shù)后2周，表皮下的真皮組織與SIS染色程度不一，明顯表現(xiàn)為兩層結(jié)構(gòu)，兩者的膠原排列不同。脫細胞SIS內(nèi)可見新生小血管長入，大量炎性細胞浸潤，有成纖維細胞由創(chuàng)面遷入

5、生長。術(shù)后4周，復(fù)合皮的表皮下仍然可見兩種不同表現(xiàn)的膠原纖維結(jié)構(gòu)，仍然有大量炎性細胞浸潤，有大量成纖維細胞遷入，可見大量的新生血管。術(shù)后6周，復(fù)合皮下已經(jīng)不能區(qū)分明顯的真皮組織及脫細胞SIS兩種膠原纖維結(jié)構(gòu)，而是被同一性的膠原結(jié)構(gòu)所取代；炎性細胞浸潤明顯減少，可見大量的新生血管及成纖維細胞。 結(jié)論： l、采用胰蛋白酶、EDTA、NaCL 聯(lián)合脫細胞的方法處理制備脫細胞SIS，可以完全除去具有抗原成分的細胞；得到的脫細胞S