金銀花水煎液對表皮葡萄球菌生物膜抑制作用的體外研究.pdf

1、目的：
　　1、觀察表皮葡萄球菌及由其形成的細(xì)菌生物膜在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中的生長狀態(tài)及生長量，選擇長勢較好的菌株作為實(shí)驗(yàn)菌株。
　　2、制備金銀花水煎液，將對倍稀釋的藥液作用于表皮葡萄球菌生物膜，測量金銀花水煎液對表皮葡萄球菌生物膜的最小抑菌濃度（MIC），并觀察不同濃度藥液對細(xì)菌生物膜黏附作用的影響。
　　3、用不同濃度的金銀花水煎液干預(yù)生長程度不同的細(xì)菌生物膜模型，并用光學(xué)顯微鏡及電子掃描顯微鏡觀察對其形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。<

2、br>　　方法：
　　1、用剛果紅平板法定性臨床上分離的表皮葡萄球菌產(chǎn)膜菌株，并將其接種于96孔微量培養(yǎng)板中用酶標(biāo)儀在不同時(shí)間測定其 A值，判斷細(xì)菌生長量的變化；用同樣方法測定附著于96孔板中細(xì)菌生物膜生長量的變化。
　　2、用水煎法制備生藥濃度為1g/lmL的金銀花水煎液。
　　3、用對倍稀釋的金銀花水煎液作用于表皮葡萄球菌形成的生物膜，與陰性組對照判斷其最低抑菌濃度。
　　4、用不同藥物濃度的金銀花水煎液作用

3、于不同生長狀態(tài)的表皮葡萄球菌生物膜，用酶標(biāo)儀測定其黏附于96孔板上細(xì)菌的存活量來判定其對細(xì)菌黏附作用的影響。
　　5、以載玻片為載體使其生長細(xì)菌生物膜，用金銀花水煎液及紅霉素分別對其作用，對比觀察細(xì)菌生物膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的改變。
　　結(jié)果：
　　1、培養(yǎng)過程中可見剛果紅平板中的菌落逐漸增加，3d后形成表皮葡萄球菌生物膜。細(xì)菌生長量統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：隨著培養(yǎng)時(shí)間的不斷增加，胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）中表皮葡萄球菌的濃度呈上升趨勢，

4、但黏附在96孔板表面上的細(xì)菌或形成的生物膜從4h后開始出現(xiàn)，隨著時(shí)間的延長，其附著量沒有明顯變化。
　　2、隨著金銀花水煎液濃度遞增，其對表皮葡萄球菌生物膜的抑制作用逐漸增強(qiáng),金銀花水煎液對表皮葡萄球菌生物膜的MIC為125mg/ml，當(dāng)濃度達(dá)到250mg/ml時(shí)，金銀花水煎液的抑菌作用不在增加，陽性對照組紅霉素對表皮葡萄球菌的抑制作用較強(qiáng)。
　　3、與陰性對照孔相比，1000、100mg/ml濃度的金銀花水煎液對表皮葡萄球

5、菌生物膜形成初期（1h、4h）的黏附有較強(qiáng)抑制作用，對成熟生物膜（8h）黏附的抑制作用減弱；100mg/ml濃度的金銀花水煎液對表皮葡萄球菌生物膜抑制作用較??；陽性對照組紅霉素對表皮葡萄球菌生物膜的抑制作用較強(qiáng)。
　　4、對于生長3天的表皮葡萄球菌生物膜，當(dāng)用250mg/ml的金銀花水煎液對其作用時(shí)發(fā)現(xiàn)：6h后，黏附的表皮葡萄球菌減少，生物膜無明顯變化(圖3-B1)；1d時(shí)，表皮葡萄球菌黏附量明顯減少，細(xì)菌生物膜遭破壞(圖3-B2

6、)；3d時(shí)，黏附的細(xì)菌生物膜部分游離，生物膜表面呈魚鱗狀(圖3-B3)；7d時(shí)，細(xì)菌生物膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞，生物膜被大量游離，載玻片上僅存少量斑塊狀影。
　　結(jié)論：
　　1、根據(jù)對表皮葡萄球菌生物膜生長量的測定表明4h是細(xì)菌開始黏附或生物膜開始形成的時(shí)間。
　　2、本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明金銀花水煎液對表皮葡萄球菌生物膜的MIC為125mg/ml，另外也印證了陽性組紅霉素確實(shí)對表皮葡萄球菌的抑制作用較強(qiáng)。
　　3、高濃度的金