甘氨酸對(duì)缺氧和燒傷大鼠心肌的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、嚴(yán)重?zé)齻缙诎l(fā)生的“休克心”，是誘發(fā)或加重?zé)齻菘?，?dǎo)致其他組織器官缺血缺氧損害和功能障礙的重要原因，因此在燒傷早期實(shí)施有效的心肌保護(hù)措施對(duì)糾正休克、防治組織器官缺血缺氧損害具有重要意義。近年來的研究提出，游離的甘氨酸具有顯著的細(xì)胞保護(hù)作用。甘氨酸可明顯減輕缺血、再灌注所致的骨骼肌損傷；減輕細(xì)胞因子的釋放及鈣超載和氧自由基的產(chǎn)生；還能減輕內(nèi)毒素血癥，降低內(nèi)毒素血癥大鼠的死亡率。但甘氨酸是否對(duì)燒傷后心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用及其作用機(jī)制尚未見報(bào)

2、道。本研究通過建立體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞缺氧模型和大鼠30％燒傷模型，從心肌的形態(tài)學(xué)、酶學(xué)等一系列指標(biāo)的改變，以明確甘氨酸對(duì)缺氧和燒傷早期大鼠心肌損害的保護(hù)作用。然后通過觀察體外培養(yǎng)的心肌細(xì)胞鈣離子、膜電位及其受體的變化，探討其保護(hù)作用機(jī)理。 材料與方法：一、體外實(shí)驗(yàn)1.模型與分組：離體培養(yǎng)的SD乳鼠心肌細(xì)胞，分為常氧組(N)、常氧加甘氨酸組(NG)、缺氧組(1％氧濃度)(H)、甘氨酸處理加缺氧組(GH組)、甘氨酸加anti-G

3、lyRα1多克隆抗體阻斷劑加缺氧組甘氨酸加甘氨酸受體激動(dòng)劑Taurine加缺氧組(GHT)。 2.觀測指標(biāo)和方法(1)缺氧1、3、6、12、24h后，取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，紫外分光光度計(jì)測LDH、CK含量，缺氧6h后心肌細(xì)胞存活率采用臺(tái)盼藍(lán)排斥法。 (2)離體培養(yǎng)的大鼠心肌細(xì)胞，采用特異熒光探針，在激光共聚焦下檢測缺氧6h后心肌細(xì)胞游離鈣及膜電位的變化。 (3)心肌細(xì)胞甘氨酸受體α1亞基采用免疫組織化學(xué)熒光染色法檢測

4、。 二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.模型與分組：采用SD大鼠致成30％TBSAⅢ°燙傷模型，試驗(yàn)分為正常組(N)、5燒傷組(B)和甘氨酸處理組(G)。 2.觀測指標(biāo)和方法(1)HE染色觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)變化。(2)常規(guī)方法檢測血清中LDH、CK含量。(3)ELISA檢測血清中TnI含量。 主要結(jié)果：一、體外實(shí)驗(yàn)1.缺氧1、3、6、12、24h后，心肌細(xì)胞損傷逐漸加重，其釋放的LDH逐漸增高，而在三種不同濃度的甘氨酸處理后，缺

5、氧心肌細(xì)胞釋放LDH明顯減少；并且甘氨酸濃度越高，心肌細(xì)胞釋放LDH越少，即呈現(xiàn)濃度依賴性。 2.缺氧1、3、6、12、24h后，心肌細(xì)胞上清液中CK逐漸增高，在加入甘氨酸可以明顯減少缺氧后心肌細(xì)胞CK釋放。 3.缺氧6h后心肌細(xì)胞存活率明顯下降，甘氨酸處理組心肌細(xì)胞的存活率顯著提高(P＜0.01)。 4.常氧和缺氧心肌細(xì)胞免疫組織化學(xué)熒光染色，在熒光倒置顯微鏡下觀察，可見心肌細(xì)胞膜上存在GlyRα1亞基。

6、 5.心肌細(xì)胞鈣離子的測定：缺氧6h后心肌細(xì)胞發(fā)生明顯的鈣超載，加入甘氨酸后鈣超載明顯減輕，而加入anti-GlyRα1阻斷甘氨酸受體α1亞基后缺氧細(xì)胞鈣超載又明顯加重；在加入甘氨酸受體激動(dòng)劑Taurine后鈣超載又明顯減輕。 6.心肌細(xì)胞缺氧6h后，膜電位熒光強(qiáng)度較正常心肌細(xì)胞明顯降低；加入甘氨酸后膜電位熒光強(qiáng)度顯著增高，提示缺氧后心肌細(xì)胞膜發(fā)生明顯的去極化，加入甘氨酸可使心肌細(xì)胞去極化明顯減輕。 二、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1.燙

7、傷后3h開始大鼠血清中LDH、CK均明顯升高，分別在傷后6、12h達(dá)高峰，后逐漸回落。而甘氨酸處理組與燒傷組比較，血清中LDH、CK含量明顯降低(P＜0.01) 2.燙傷后1h，TnI即明顯升高，傷后6h達(dá)高峰，后漸回落。而甘氨酸處理組血清TnI與燒傷組相比明顯降低。 3.心肌組織病理觀察，光鏡下可見甘氨酸處理組大鼠心肌組織病理改變明顯減輕。 結(jié)論：本研究體外試驗(yàn)與動(dòng)物試驗(yàn)的結(jié)果表明，甘氨酸對(duì)體外培養(yǎng)的乳鼠缺氧心