染料木素對(duì)大鼠心肌缺血缺氧損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的：利用異丙腎上腺素誘導(dǎo)的SD大鼠急性心肌缺血缺氧損傷模型和二氯化鈷刺激引起的體外培養(yǎng)H9c2大鼠心肌細(xì)胞缺氧模型，觀察染料木素對(duì)心肌缺氧損傷的保護(hù)作用并初步探討其作用機(jī)制，為染料木素在心血管疾病中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　?。?）染料木素對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)SD大鼠急性心肌缺血的保護(hù)作用：健康SD大鼠60只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為正常、模型、陽(yáng)性藥物和染料木素（低、中、高劑量）六組，以灌胃法連續(xù)給藥7天

2、，每天一次，其中正常組大鼠給予等量溶媒（DMSO：NaCl=1：9）、陽(yáng)性藥組大鼠給予復(fù)方丹參滴丸（85mg/kg）、染料木素保護(hù)組大鼠給予不同劑量的染料木素（7.5、15、30mg/kg）；第8天灌胃1h后，除正常組外的其余5組大鼠接著均采用多點(diǎn)皮下注射異丙腎上腺素(2mgkg-1day-1），連續(xù)重復(fù)處理3天，建立SD大鼠急性心肌缺血缺氧損傷模型。用BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)同步記錄最后一次注射異丙腎上腺素后大鼠的Ⅱ?qū)?lián)心電圖，

3、分析T波幅度、J點(diǎn)位置和心率的變化。然后心尖取血，制備血清，按照試劑盒說(shuō)明書用紫外-可見分光光度計(jì)檢測(cè)大鼠血清中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性。最后游離大鼠心臟中下1/3處心肌組織及胸主動(dòng)脈，用10％甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，常規(guī)HE染色，在電子顯微鏡下觀察病理組織的變化情況。
　　（2）染料木素對(duì)二氯化鈷致培養(yǎng)的H9c2大鼠心肌細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用：首先以不同濃度的

4、二氯化鈷（0、200、400、600、800、1000μM）刺激培養(yǎng)的H9c2大鼠心肌細(xì)胞不同時(shí)間（0、6、12、24、48h），通過(guò)MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，Western-Blot檢測(cè)各組細(xì)胞缺氧誘導(dǎo)因子HIF-1α和凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3的表達(dá)。以細(xì)胞損傷小但HIF-1α蛋白表達(dá)高為主要參考指標(biāo)選擇二氯化鈷的最佳處理濃度和最佳處理時(shí)間。隨后以不同濃度的染料木素（0、50、100、150、200μM）預(yù)處理培

5、養(yǎng)的H9c2大鼠心肌細(xì)胞不同時(shí)間（0、0.5、4、8h）后，再采用上述最佳濃度和最佳處理時(shí)間的二氯化鈷刺激細(xì)胞，然后檢測(cè)細(xì)胞活性和各組細(xì)胞中HIF-1α、Notch1、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　（1）染料木素能改善異丙腎上腺素所致急性心肌缺血大鼠的心電損傷，抬高T波幅度，減小J點(diǎn)偏移，減慢心率；也可降低大鼠血清中LDH、CK、MDA水平，提高SOD活性，抑制異丙腎上腺素所致大鼠的氧化

6、應(yīng)激損傷；亦可降低心臟指數(shù)，改善異丙腎上腺素所致大鼠心肌組織的病變程度。
　?。?）采用400μmol/L的二氯化鈷作用24h能構(gòu)建最佳H9c2大鼠心肌細(xì)胞缺氧模型，此時(shí)細(xì)胞損傷小但HIF-1α蛋白表達(dá)高，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的損傷條件。
　?。?）預(yù)先給予染料木素可降低H9c2大鼠心肌細(xì)胞中HIF-1α蛋白表達(dá)，增加Notch1蛋白表達(dá)，對(duì)二氯化鈷誘導(dǎo)的H9c2大鼠心肌細(xì)胞缺氧損傷有保護(hù)作用；染料木素還可干預(yù)二氯化鈷刺激引起的H9