甘氨酸對(duì)大鼠肝纖維化與肝硬化的治療作用及機(jī)制.pdf

1、目的：本文旨在探討甘氨酸對(duì)肝纖維化與肝硬化的治療作用，以進(jìn)一步揭示其作用機(jī)制。 方法：采用復(fù)合因素致肝硬化模型。將40只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組(C組)，肝纖維化(HF)模型組，肝硬化(HC)模型組，肝纖維化甘氨酸干預(yù)組HF+G及肝硬化甘氨酸干預(yù)組HC+G。觀察外周血漿內(nèi)毒素(endotoxin)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平，采用放射免疫法測(cè)定血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF

2、-β1)，血漿內(nèi)皮素-1(ET-1)，降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)及心鈉素(ANT)的含量。肝臟VG(膠原纖維染色)，HE染色確定肝纖維化分期，免疫組織化學(xué)染色分析觀察肝臟肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的表達(dá)情況。 結(jié)果：1、肝硬化大鼠模型建立情況： 肝臟VG，HE染色結(jié)果證實(shí)，模型組4周末為肝纖維化病變期， 8周末為肝硬化病變期。而在甘氨酸干預(yù)組中，與相應(yīng)的模型組比較病變有所減輕。 2、腸源性?xún)?nèi)毒素血癥(IETM)形

3、成情況： 與正常組比較，血漿endotoxin水平在4、8周末呈遞增趨勢(shì)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01。在甘氨酸干預(yù)組中，與相應(yīng)的模型組比較endotoxin水平顯著降低，P<0.05。 3、血清細(xì)胞因子及反映肝細(xì)胞損傷的相關(guān)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果： 血清TNF-α，TGF-β1水平在4、8周末呈遞增趨勢(shì)，與正常組比較結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P<0.01或P<0.05，甘氨酸干預(yù)組中，與相應(yīng)模型組比較TNF-α，TNF-β1

4、水平降低，P<0.05。反映肝細(xì)胞損傷的指標(biāo)ALT水平在4、8周末均比正常組增高，P<0.01，甘氨酸干預(yù)組中，與相應(yīng)模型組比較ALT水平降低，P<0.05。 4、血漿血管活性物質(zhì)的測(cè)定結(jié)果： 血漿ET-1在建模4周末與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在8周末顯著增高，P<0.01，在HC+G組低于HC組，P<0.05。CGRP在4、8周末均比對(duì)照組增高，P<0.01或P<0.05，在甘氨酸干預(yù)組與相應(yīng)模型組比較CGRP水平降

5、低，P<0.05。ANP水平在4、8周末與正常組相比均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在甘氨酸干預(yù)組與相應(yīng)模型組比較ANT水平明顯增高，P<0.01。 5、肝組織HGF的表達(dá)情況： 正常組肝臟幾乎不表達(dá)HGF。建模4、8周末HGF表達(dá)與正常組相比明顯增多，陽(yáng)性顆粒主要見(jiàn)于肝星形細(xì)胞及肝竇內(nèi)皮細(xì)胞，尤以纖維間隔附近明顯。8周末HGF表達(dá)與4周末相比有所降低。在甘氨酸干預(yù)組HGF的表達(dá)較相應(yīng)的模型組進(jìn)一步增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05

6、。 6、相關(guān)分析結(jié)果： 血漿endotoxin與ALT相關(guān)性分析：r=0.585，P<0.05呈正性相關(guān)。 血漿endotoxin與血清TNF-a相關(guān)性分析：r=0.779，P<0.01呈正性相關(guān)。 血漿endotoxin與血清TNF-β1相關(guān)性分析：r=0.603，P<0.01呈正性相關(guān)。 血漿endotoxin與ET-1相關(guān)性分析：r=0.566，P<0.05呈正性相關(guān)。 血漿endo

7、toxin與CGRP相關(guān)性分析：r=0.469，P<0.05呈正性相關(guān)。 血漿endotoxin與ANP相關(guān)性分析：r=0.102，P=0.687。 血清TNF-a與血漿ET-1相關(guān)性分析：r=0.431，P=0.074。 血清TNE-a與血漿CGRP相關(guān)性分析：r=0.395，P=0.105。 血漿ET-1與血漿CGRP相關(guān)分析：r=0.136，P=0.591。 血清TGF-β1與肝臟HGF相關(guān)

8、分析：r=0.550，P<0.05呈正性相關(guān)。 結(jié)論：1、肝纖維化肝硬化大鼠發(fā)生了IETM，而且從血漿endotoxin與血清TNF-a的相關(guān)性分析可以看出，IETM與TNF-a增高密切相關(guān)。同時(shí)血漿endotoxin與ET-1，及血漿endotoxin與CGRP相關(guān)分析結(jié)果提示，IETM可通過(guò)Kupffer細(xì)胞的激活及TNF-a分泌和合成增多，誘導(dǎo)血管活性物質(zhì)ET-1及CGRP表達(dá)增多。甘氨酸可通過(guò)拮抗內(nèi)毒素的生物學(xué)效應(yīng)降低肝

9、纖維化肝硬化大鼠血漿ET-1、CGRP水平，并通過(guò)未知途徑升高血漿ANP水平，這對(duì)延緩門(mén)脈高壓的形成、減輕肝臟損傷具有重要作用。 2、IETM持續(xù)存在可激活Kupffer細(xì)胞、肝星形細(xì)胞釋放TNF-a、TNF-β1等多種細(xì)胞因子促進(jìn)纖維化形成。建模早期肝細(xì)胞變性、壞死較嚴(yán)重，機(jī)體代償性地表達(dá)HGF，以利于損傷的修復(fù)與肝細(xì)胞再生。而在甘氨酸干預(yù)組，HGF的進(jìn)一步高表達(dá)則可抑制纖維化的形成，減輕肝臟損傷。 由上所述，我們認(rèn)為