NGF刺激PC12細(xì)胞神經(jīng)分化過(guò)程中轉(zhuǎn)錄因子E2F1參與PTPRO表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、PTPRO是受體型酪氨酸磷酸酯酶家族的一員，其功能主要涉及神經(jīng)組織中軸突的生長(zhǎng)和導(dǎo)向，以及腫瘤抑制。PTPRO的表達(dá)具有組織特異性，在哺乳動(dòng)物中PTPRO主要表達(dá)于不同發(fā)育時(shí)期的腎臟組織和神經(jīng)組織，而在很多腫瘤細(xì)胞中則通過(guò)DNA甲基化沉默。有文獻(xiàn)報(bào)道，PTPRO在機(jī)體發(fā)育和腦的成熟中發(fā)揮重要作用，例如在腎臟中，PTPRO表達(dá)于發(fā)育早期的腎小球細(xì)胞頂部和發(fā)育成熟的腎小球足細(xì)胞頂部；在腦中，PTPRO基因最高表達(dá)出現(xiàn)于妊娠中后期，這一時(shí)期也

2、是腦部軸突發(fā)生的主要時(shí)期。已有研究證明，受體型酪氨酸磷酸酯酶家族（RPTPs）成員在調(diào)節(jié)果蠅神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中起主要作用。在脊椎動(dòng)物中，許多受體型酪氨酸磷酸酯酶家族（RPTPs）成員例如：typeⅡa RPTPs，typeⅢ RPTP已經(jīng)在軸突生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用，但是PTPRO參與軸突生長(zhǎng)的具體機(jī)制以及表達(dá)調(diào)控機(jī)制卻報(bào)道很少。 本論文旨在研究PTPRO因在NGF誘導(dǎo)PC12軸突分化過(guò)程中表達(dá)升高的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制。通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PC

3、R（RT—PCR）、real—time RCR和Western blotinging檢測(cè)我們發(fā)現(xiàn)，NGF誘導(dǎo)PC12軸突分化后，PTPRO基因表達(dá)發(fā)生了明顯的上調(diào)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染和熒光素酶報(bào)告基因分析結(jié)果顯示，外源過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子E2F1能顯著提高PTPRO啟動(dòng)子熒光素酶報(bào)告基因的活性。real—time RCR和western bloting結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄因子E2F1提高了細(xì)胞內(nèi)源PTPTO基因的mRNA和蛋白表達(dá)水平。點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)確定了PTP