轉(zhuǎn)錄因子E2F1通過SRC3調(diào)節(jié)樹突狀細胞成熟機制的研究.pdf

1、作為免疫系統(tǒng)中最重要的抗原遞呈細胞，樹突狀細胞起到起始適應(yīng)性免疫應(yīng)答并連接固有免疫應(yīng)及適應(yīng)性免疫應(yīng)答的作用。樹突狀細胞的成熟和活化，需要多個信號通路和轉(zhuǎn)錄因子的協(xié)調(diào)，目前發(fā)現(xiàn)和報道的大部分研究集中于樹突狀細胞成熟和分化的正向調(diào)控。我們實驗室前期研究觀察到E2F1負調(diào)控樹突狀細胞成熟，提示了一個樹突狀細胞可能的反饋調(diào)節(jié)通路。為此，該研究擬深入探討和揭示E2F1反饋調(diào)節(jié)樹突狀細胞成熟和分化的可能分子機制。
　　 SRC3是細胞代謝中

2、重要的共激活因子，以往曾有報導(dǎo)SRC3是E2F1的調(diào)控基因。另外報導(dǎo)還發(fā)現(xiàn)，SRC3敲除小鼠中淋巴瘤發(fā)病率提高，提示其可能參與免疫細胞的成熟以及分化。
　　 本研究中，在對敲低E2F1的DC2.4細胞中檢測發(fā)現(xiàn)，SRC3的表達水平下調(diào);而在E2F1過表達細胞中，SRC3的表達水平也隨著E2F1的高表達上調(diào)。上述實驗結(jié)果提示SRC3可能是E2F1的靶基因。深入研究進一步發(fā)現(xiàn)，改變SRC3表達時，引起了包括AKT及p38等多條與樹突

3、狀細胞成熟相關(guān)的信號通路的變化，同時部分樹突狀細胞表面受體也發(fā)生了顯著的變化。實驗結(jié)果提示E2F1可能通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)SRC3，負調(diào)控樹突狀細胞成熟。為進一步揭示轉(zhuǎn)錄因子E2F1對SRC3的轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制，對SRC3啟動子序列進行分析，發(fā)現(xiàn)其中含有多個E2F1和Sp1潛在靶位點。在DC2.4細胞中敲低Sp1，檢測證實Sp1可負調(diào)控SRC3。目前已構(gòu)建了含有SRC3啟動子序列上游-600-+58片度的報告基因質(zhì)粒以及一系列截短質(zhì)粒，細致地研究E