Galectin-3通過EGFR介導調控腫瘤細胞e-cadherin表達的機制研究.pdf

1、半乳糖凝集素(galectin)家族是哺乳動物β-半乳糖苷連接蛋白，與β-半乳糖苷有很強的親和力，并且都含有一段保守的糖識別結構域(carbohydraterecognition domain，CRD)。半乳糖凝集素-3(galectin-3)是galectin家族中唯一的嵌合型代表，含有1個CRD和12個氨基酸殘基組成的N端結構域。Galectin-3蛋白含251個氨基酸殘基，相對分子質量為31，000 Da，調節(jié)腫瘤細胞的凋亡、粘附

2、、增殖和血管形成。Galectin-3具有各種各樣的生物功能是因為其復雜的細胞亞結構分布，使它能與各種不同的配體結合產生生物效應。
　　細胞粘附分子(cell adhesion molecules，CAMs)，通過調節(jié)細胞與細胞之間和細胞與細胞外基質之間的反應參與腫瘤細胞轉移過程?；谛蛄型葱院徒Y構不同，CAMs家族分成以下幾類:鈣粘蛋白(cadherin)，選擇素(selectin)，整合素(integrin)，免疫球蛋白超家

3、族，淋巴細胞尋靶受體，如CD44。E-鈣粘蛋白(E-cadherin)是經典鈣粘蛋白中的原型成員，在保持上皮細胞極性和完整性方面發(fā)揮特別重要的作用。在細胞外，毗鄰細胞的兩個E-cadherin分子通過其細胞外部分含有鈣離子的五個重復序列片段結合，形成黏著斑。在細胞內，E-cadherin通過α-，β-，和p-120 catenin與細胞骨架連接。
　　本論文研究galectin-3和E-cadherin這兩個腫瘤因子的內在聯系及其

4、調節(jié)腫瘤發(fā)生的機制，而EGFR通路與galectin-3和E-cadherin都有緊密的聯系，所以我們首先探討了EGF誘導對二者聯系的必要性。MTT實驗顯示，無論EGF的刺激與否，galectin-3抑制劑β-Lactose都能抑制腫瘤細胞A549的增殖，所以， EGF刺激對于galectin-3的抗凋亡是無關緊要的。但劃痕實驗顯示，EGF可以誘導A549的遷移，western blotting實驗結果也顯示只有在EGF存在時，gale

5、ctin-3對E-cadherin的表達才有影響，我們研究的E-cadherin主要參與腫瘤的侵襲轉移，所以我們選擇EGF誘導進行后續(xù)實驗。采用western blotting摸索EGF誘導EGFR磷酸化的時間相關性，結果顯示，在15min時，p-EGFR表達最高，為使實驗結果更明顯，后續(xù)都采用EGF誘導15min進行實驗。
　　Western blotting結果顯示在EGF誘導下，在高表達galectin-3的人乳腺癌細胞MC

6、F-7和人結腸癌細胞HCT-116中，β-Lactose下調E-cadherin和β-catenin的表達，而在低表達galectin-3的A549細胞中，β-Lactose對E-cadherin和β-catenin的表達無影響。結果表明，細胞表面的galectin-3上調腫瘤細胞內E-cadherin和β-catenin的表達。
　　Western blotting結果顯示在EGF誘導下，外源性的人重組galectin-3下調A

7、549中E-cadherin的表達，上調β-catenin的表達。為了進一步證明galectin-3調節(jié)β-catenin的具體機制，分別提取A549細胞中胞漿和胞核蛋白后進行westernblotting實驗，結果顯示galectin-3可促使β-catenin進入細胞核。另外，免疫共沉淀實驗顯示，外源性galectin-3對E-cadherin/β-catenin復合體沒有顯著影響。這些結果表明，外源性galectin-3下調腫瘤細