轉(zhuǎn)錄因子E2F1對人FOXC1基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、FOXC1是轉(zhuǎn)錄因子Forkheadbox（Fox）家族中的亞家族FOXC的成員之一，編碼它的基因定位在人的6p25上。FOXC1基因的轉(zhuǎn)錄本存在于人多種組織器官中。FOXC1蛋白與其他轉(zhuǎn)錄因子一樣，含有DNA結(jié)合區(qū)、轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)和一些其他的結(jié)構(gòu)（抑制區(qū)/磷酸化區(qū)）。FOXC1基因參與眼睛的發(fā)育，該蛋白的改變可出現(xiàn)青光眼、Axenfeld—Rieger綜合征和虹膜發(fā)育異常等視表現(xiàn)型。此外，F(xiàn)OXC1基因失活突變的小鼠還可出現(xiàn)心、腎、腦膜、

2、骨骼和體節(jié)發(fā)育等多個器官系統(tǒng)的缺陷。目前有關(guān)FOXC1的研究多集中在它在眼睛、上頜骨、頭骨以及面部腺體等各種組織發(fā)育中的作用，以及FOXC1基因突變導(dǎo)致Axenfeld—Rieger畸形等多種生理疾病的發(fā)生問題上。而針對FOXC1基因自身表達(dá)調(diào)控的研究卻很少有報道。 本論文旨在研究FOXC1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。細(xì)胞轉(zhuǎn)染和熒光素酶報告基因分析結(jié)果顯示，外源過表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子E2F1能顯著提高FOXC1啟動子熒光素酶報告基因的轉(zhuǎn)錄活性。反轉(zhuǎn)

3、錄PCR（RT—PCR）、realtimePCR和westemblot結(jié)果表明，轉(zhuǎn)錄因子E2F1提高了細(xì)胞內(nèi)源FOXC1基因的mRNA和蛋白的表達(dá)水平。點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)確定了FOXC1啟動子上-485位點(diǎn)和-301位點(diǎn)對E2F1發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活功能是十分重要的。而且染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）實(shí)驗(yàn)表明E2F1能夠直接結(jié)合在FOXC1的啟動子上。 本項(xiàng)研究初步探討了FOXC1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的分子機(jī)制，確定了FOXC1為轉(zhuǎn)錄因子E2F1又一個全新