E2F1調(diào)控PBK表達(dá)上調(diào)導(dǎo)致前列腺癌不良預(yù)后.pdf

1、研究背景和目的:前列腺癌（PCa）是一種常見的男性泌尿系統(tǒng)腫瘤，盡管在我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率和死亡率都相對(duì)于歐美國(guó)家仍然處于相對(duì)低的水平，但隨著我國(guó)人民生活水平的提高、壽命的延長(zhǎng)、飲食結(jié)構(gòu)的改變以及醫(yī)療提高，前列腺癌的發(fā)病率在我國(guó)逐年上升，發(fā)病率在男性泌尿生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中上升至第三位。早期前列腺癌患者在一定時(shí)期內(nèi)行去勢(shì)治療(ADT)對(duì)腫瘤有明顯的抑制作用，可在成功接受手術(shù)治療并配合相應(yīng)的輔助治療后夠獲得良好的治療效果，但是相當(dāng)部分前列腺

2、癌患者在治療一段時(shí)間后，前列腺癌逐漸對(duì)內(nèi)分泌治療產(chǎn)生抵抗，轉(zhuǎn)變?yōu)槿?shì)抵抗前列腺癌(CRPC），這部分病人多死于腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移?，F(xiàn)階段，如何有效地降低前列腺癌的侵襲能力和防治前列腺癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移已經(jīng)成為攻克前列腺癌的一個(gè)重要難題。另一方面，前列腺癌的自然病史和預(yù)后都呈現(xiàn)出多樣性，既可終身無任何癥狀，亦可表現(xiàn)出高度的侵襲性，即使行根治性手術(shù)后也可很快地發(fā)生轉(zhuǎn)移并引起可怕的疼痛，最終導(dǎo)致死亡?；颊叩淖罴阎委煼桨感枰R床醫(yī)生對(duì)早期患者前列腺腫瘤的

3、潛在侵襲性及預(yù)后進(jìn)行客觀評(píng)估，以指導(dǎo)患者個(gè)體化治療，同時(shí)避免過度治療及大量醫(yī)療資源浪費(fèi)。目前，前列腺癌的篩查及診斷主要依靠直腸前列腺指檢、影像學(xué)、血清學(xué)和病理穿刺。但它們均不能很好的作為前列腺癌簽證侵襲性和預(yù)后進(jìn)行客觀評(píng)估。PSA是目前較為公認(rèn)的前列腺癌指標(biāo)，對(duì)前列腺癌的診斷敏感性比較高，特別是晚期患者（86％~100%）。但血清PSA水平受很多因素影響，前列腺增生、急性前列腺炎及直腸指檢等均可能導(dǎo)致血清PSA升高。當(dāng)它處于4～10 n

4、g/毫升時(shí)，是前列腺癌的診斷灰區(qū)，難以區(qū)分前列腺癌及前列腺增生癥，將更難以判定腫瘤的預(yù)后。而進(jìn)行病理穿刺檢查時(shí)，也會(huì)受取材的部位以及病理醫(yī)生主觀判斷的影響，且由于腫瘤的異質(zhì)性，僅通過形態(tài)學(xué)檢查很難評(píng)斷腫瘤的生物學(xué)行為，因而難以對(duì)前列腺癌的惡性程度進(jìn)行客觀、準(zhǔn)確的判定。
　　基于前列腺癌的特點(diǎn)及目前診療水平，深入研究探討前列腺癌侵襲力的分子生物學(xué)機(jī)制，尋找和發(fā)現(xiàn)能夠準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)前列腺癌進(jìn)展、復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的新型分子標(biāo)記物將會(huì)使我們進(jìn)一步地

5、了解前列腺癌發(fā)展過程中的潛在機(jī)制，為前列腺癌患者提供更有效的靶向治療，達(dá)到更好的治療效果。
　　在既往課題中，用基因芯片技術(shù)對(duì)中國(guó)人群前列腺癌與對(duì)照良性前列腺組織進(jìn)行檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，總共有1444個(gè)基因（差異倍數(shù)≥1.5；P≤0.05）為差異表達(dá)基因。其中，有769個(gè)上調(diào)基因（53%）和675個(gè)下調(diào)基因（47%）。在芯片結(jié)果中發(fā)現(xiàn)PBK基因在前列腺癌表達(dá)明顯升高，達(dá)到16.33倍（p=0.043），在上調(diào)表達(dá)基因中排第7位。所以，預(yù)測(cè)

6、PBK的高表達(dá)可能是引起前列腺癌發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等危險(xiǎn)因素。并且利用多種預(yù)測(cè)及檢測(cè)手段發(fā)現(xiàn)，PBK受轉(zhuǎn)錄因子E2F1調(diào)控。
　　PDZ連接激酶/T-LAK細(xì)胞源蛋白激酶(PBK/TOPK)是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的新成員，由322個(gè)氨基酸組成，是一種新近發(fā)現(xiàn)的絲-蘇氨酸激酶。在正常組織中，Gaudet et al在成人睪丸、胎盤、心肌和胰腺組織中檢測(cè)到了PBK的mRNA，其中胎盤含量最豐富;并在骨骼肌、腎臟、肝臟和肺中

7、檢測(cè)到PBK的低水平表達(dá)。它在許多腫瘤中表達(dá)上調(diào)并導(dǎo)致疾病的不良預(yù)后，如淋巴瘤、白血病、乳腺癌、黑色素瘤和結(jié)腸癌等。Nandi等人應(yīng)用阿霉素阻遏白血病細(xì)胞生長(zhǎng)之后，PBK的表達(dá)明顯下降，表明PBK表達(dá)可能調(diào)控白血病細(xì)胞的生長(zhǎng)或存活。相類似地，Park等人發(fā)現(xiàn)，運(yùn)用siRNA抑制PBK的表達(dá)可顯著抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，敲除內(nèi)源性PBK可抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，導(dǎo)致胞質(zhì)分裂異常，最終腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　E2F1作為轉(zhuǎn)錄因子可調(diào)控許多下游基因，

8、有報(bào)道稱，在淋巴瘤中PBK的表達(dá)受細(xì)胞周期轉(zhuǎn)錄因子E2F1調(diào)控。E2F轉(zhuǎn)錄因子家族對(duì)于細(xì)胞的分化、增值和凋亡具有重要的調(diào)節(jié)作用。E2F家族蛋白的活性依賴于視網(wǎng)膜瘤抑制因子（retinoblastoma tumor suppressor）的相互作用，激活后能夠引起下游生長(zhǎng)因子的信號(hào)傳導(dǎo)，從而調(diào)節(jié)與細(xì)胞周期相關(guān)的基因表達(dá)。E2F1是該轉(zhuǎn)錄因子家族中最具代表性的一員，可以通過P53依賴或非依賴通路激活A(yù)RF、TP73、APAF-1、和BH3

9、only BCL2家族蛋白，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡。以往的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞中的DNA損傷或者促細(xì)胞分裂信號(hào)傳導(dǎo)能夠誘導(dǎo)E2F1表達(dá)的上調(diào)從而促進(jìn)細(xì)胞的凋亡過程，由E2F1誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是一種對(duì)抗腫瘤細(xì)胞增殖的保護(hù)機(jī)制。然而，近年來的研究發(fā)現(xiàn)高分期的腫瘤細(xì)胞中，RB能夠協(xié)同相關(guān)的致癌因子抑制E2F1所誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，或者被EGFR/Ras/Raf信號(hào)通路阻斷其抑癌活性；體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明阻斷E2F1在轉(zhuǎn)移黑色素瘤中的表達(dá)，明顯抑制了腫瘤細(xì)胞

10、的遷徙、侵襲和轉(zhuǎn)移能力。E2F1在不同的人類腫瘤細(xì)胞中都出現(xiàn)不同程度的異常表達(dá)，其中E2F1的表達(dá)水平上升與高分期的腫瘤轉(zhuǎn)移存在著重要聯(lián)系，并且與腫瘤患者的不良預(yù)后密切相關(guān)，E2F1可能與增強(qiáng)腫瘤侵襲力的相關(guān)基因啟動(dòng)子上的位點(diǎn)結(jié)合，上調(diào)相關(guān)基因表達(dá)水平，預(yù)示著E2F1具有增強(qiáng)惡性腫瘤侵襲力的作用。另外也有研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn) E2F1對(duì)于腫瘤的局部浸潤(rùn)侵襲和形成遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移同樣存在重要的影響力。由此可見，E2F1作為人類腫瘤中一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子，具

11、有“陰陽”兩面的作用，既可以依賴自身的功能誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，阻礙腫瘤細(xì)胞的增殖分化；又能夠與相關(guān)促癌基因的轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)結(jié)合，調(diào)節(jié)基因的轉(zhuǎn)錄水平，從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲力；這種有趣的雙重作用提示其致癌作用與基因外調(diào)控機(jī)制或者組織特異性相關(guān)。Sharma的研究證實(shí)雄激素受體（androgen receptor）無論在前列腺癌細(xì)胞株還是在腫瘤種植動(dòng)物中，都受到E2F1的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，RB的缺失是E2F1結(jié)合AR轉(zhuǎn)錄位點(diǎn)的前提；他們深入分析非雄性激素依賴

12、前列腺癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制，同樣發(fā)現(xiàn)E2F1和AR表達(dá)的增加對(duì)腫瘤的進(jìn)展有重要的意義。
　　在前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)抑制E2F1表達(dá)后可降低動(dòng)物模型中腫瘤的侵襲力，表明轉(zhuǎn)錄因子E2F1可能通過某個(gè)/某些下游基因而調(diào)控腫瘤生長(zhǎng)。經(jīng)查閱文獻(xiàn)后發(fā)現(xiàn)E2F1可調(diào)控PBK導(dǎo)致腫瘤惡性程度變化。在我們之前的研究中，利用高通量芯片檢測(cè)也發(fā)現(xiàn)PBK在前列腺癌中明顯上調(diào)表達(dá)，與良性前列腺表達(dá)差異倍數(shù)達(dá)16.33倍。因此，推測(cè)E2F1可能調(diào)控PBK導(dǎo)致腫瘤侵襲

13、力變化，并推斷此通路與前列腺癌的發(fā)生及不良預(yù)后相關(guān)。據(jù)了解，在前列腺癌中PBK是否受E2F1調(diào)控，及PBK的表達(dá)情況是否能預(yù)示前列腺癌的不良預(yù)后都仍未有報(bào)道。
　　材料：臨床病例，本研究經(jīng)過廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有病例均已簽署患者知情同意書，標(biāo)本均嚴(yán)格遵守倫理及法律要求進(jìn)行處理。
　　用于QRT-PCR研究的臨床病例，包括3例PCA及配對(duì)的3例癌旁組織，組織由廣州市第一人民醫(yī)院提供。用于West

14、ern blot研究的臨床病例，4對(duì)前列腺癌及癌旁冰凍組織由廣州市第一人民醫(yī)院標(biāo)本庫(kù)提供。用于免疫組化研究的組織芯片購(gòu)買于上海芯超生物技術(shù)有限公司。每張芯片均包括98例PCA及81例對(duì)照癌旁組織，所有病例均接受了根治性前列腺癌切除術(shù)治療，并且未在術(shù)前曾經(jīng)接受抗雄激素治療或者放射性治療。所有標(biāo)本都經(jīng)過H-E染色并由病理科?？漆t(yī)生明確診斷。病理科醫(yī)生根據(jù)現(xiàn)行的國(guó)際前列腺癌病理分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（International Society of U

15、rological Pathology）對(duì)全部98例標(biāo)本進(jìn)行Gleason評(píng)分。每例標(biāo)本均記錄以下相關(guān)臨床數(shù)據(jù)：年齡，術(shù)前PSA水平，Gleason評(píng)分。為了驗(yàn)證E2F1和PBK在mRNA水平上的表達(dá)關(guān)系，利用了Tayl數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行相關(guān)性分析，Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)包含149例PCA組織及對(duì)應(yīng)癌旁組織的大樣本基因芯片庫(kù)，并且有詳細(xì)的病例臨床資料。Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)中所有149個(gè)前列腺癌病例都做了為期1~175個(gè)月的術(shù)后隨訪（中位數(shù)為51

16、個(gè)月），以手術(shù)日為起點(diǎn)，以生化復(fù)發(fā)或死亡為隨訪的終點(diǎn)。若有病例死于其它疾病將被排除隨訪。
　　方法：首先利用QRT-PCR及Western blot技術(shù)分別檢測(cè)了3對(duì)及4對(duì)前列腺癌及對(duì)應(yīng)癌旁標(biāo)本中PBK的表達(dá)差異；接著利用大樣本免疫組化芯片檢測(cè)E2F1和PBK在前列腺癌和癌旁組織中的表達(dá)差異及兩基因之間的表達(dá)相關(guān)性。179例石蠟組織標(biāo)本按照5微米的厚度進(jìn)行病理切片，使用二甲苯溶液進(jìn)行脫蠟，重新水化后的組織芯片行H-E染色或者免疫組

17、化。經(jīng)過蛋白水解消化和過氧化酶封閉組織玻片等步驟后，加入濃度為1:200/1:50（E2F1/PBK）的一抗在4C環(huán)境中過夜孵育。經(jīng)過洗滌和二抗孵育后，在顯微鏡下觀察染色情況。確認(rèn)染色程度滿意，使用蘇木紫溶液復(fù)染，封片。正常前列腺組織用作為陰性對(duì)照。每塊組織玻片分別由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生獨(dú)立觀察，所有關(guān)于臨床病理和治療效果的患者資料均對(duì)觀察者隱瞞。最后的觀察結(jié)果由兩位醫(yī)生進(jìn)行比對(duì)后確定，任何存在分歧的部分均重新觀察和討論后得出一致的

18、結(jié)果。CHIP-PCR技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證E2F1與PBK的調(diào)控關(guān)系；為了從細(xì)胞層面進(jìn)一步檢測(cè)及驗(yàn)證E2F1和PBK在前列腺癌中的作用，用病毒瞬轉(zhuǎn)技術(shù)構(gòu)建了siPBK、siE2F1及HI-E2F1前列腺癌細(xì)胞株，經(jīng)Western blot驗(yàn)證構(gòu)建成功的細(xì)胞株進(jìn)行細(xì)胞的功能實(shí)驗(yàn)，包括細(xì)胞遷移能力、細(xì)胞侵襲力及細(xì)胞增殖能力的檢測(cè)。最后利用Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)E2F1與PBK進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析，包括在前列腺癌中的表達(dá)改變、兩者之間的表達(dá)相關(guān)性以及預(yù)后

19、相關(guān)分析。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS13.0軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。所有的連續(xù)變量均表示為X?s。所有四格表資料均使用Fisher精確檢驗(yàn)，非四格表記數(shù)資料使用Pearson卡方檢驗(yàn)。在單因素和多因素分析中，Cox比例危險(xiǎn)模型用于計(jì)算PBK的表達(dá)與無PSA生化復(fù)發(fā)生存率、無腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移生存率和總體生存率之間的關(guān)系。Kaplan–Meier法主要用于生存曲線分析并經(jīng)過log-rank檢驗(yàn)。E2F1及PBK表達(dá)情況與各種臨床數(shù)據(jù)之間的

20、關(guān)聯(lián)使用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)方法驗(yàn)證。P<0.05代表具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：抑制E2F1表達(dá)降低了Lncap細(xì)胞在裸鼠內(nèi)的侵襲力：前期實(shí)驗(yàn)中，為了觀察E2F1在活體中與前列腺癌之間相互作用的影響，構(gòu)建了E2F1表達(dá)下調(diào)的LNCaP前列腺癌細(xì)胞株及其對(duì)照組分別對(duì)4只裸鼠進(jìn)行皮下注射。以每只小鼠脊柱為界分為左右兩邊，在左背部皮下接種sh-E2F1細(xì)胞，再在右邊皮下接種對(duì)照組細(xì)胞，并在約7周后處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和取出腫瘤。用動(dòng)物腫

21、瘤組織進(jìn)行了體積統(tǒng)計(jì)及免疫組化實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示兩組間體積未見明顯差異，但在抑制E2F1后，腫瘤侵襲力下降，即vimentin表達(dá)減少，E-cadherin表達(dá)增加?？梢奅2F1在動(dòng)物模型中對(duì)腫瘤體積未見明顯影響，但可以影響腫瘤的侵襲力。
　　運(yùn)用了免疫組化技術(shù)對(duì)98例前列腺癌及81例良性前列腺組織進(jìn)行染色，檢驗(yàn)E2F1在前列腺癌中表達(dá)是否改變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)E2F1主要在細(xì)胞核中表達(dá)，在PCa中表達(dá)比良性組織表達(dá)升高（PCa=4.15±1

22、.23 VS Benign=3.85±1.72，P=0.001），且在Gleason評(píng)分≥8與病理分期≥T3A的病例中，E2F1的IRS評(píng)分也比對(duì)應(yīng)的分組評(píng)分高，分別是（GS≥8=5.11±0.83，n=70 VS GS<8=4.29±1.18，n=28；P=0.001）（≥T3A期=5.11±0.83，n=70 VS

23、mRNA芯片數(shù)據(jù)庫(kù)做E2F1與PBK表達(dá)相關(guān)性分析，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)它們表達(dá)相關(guān)。與E2F1一樣，對(duì)PBK進(jìn)行了大樣本臨床組織芯片的免疫組化檢測(cè)，評(píng)分后進(jìn)行E2F1與PBK相關(guān)性統(tǒng)計(jì)分析，分析結(jié)果與Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果高度一致（r=0.492，p<0.001）。再進(jìn)一步，我們還構(gòu)建了抑制PBK、E2F1和過表達(dá)E2F1的Lncap及DU145細(xì)胞株，分別記為siPBK、si E2F1和HI-E2F1細(xì)胞株。構(gòu)建細(xì)胞株后，做了QPCR驗(yàn)證是

24、否構(gòu)建有效以做后續(xù)功能實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染siPBK的細(xì)胞株，PBK表達(dá)量明顯下降（Lncap：抑制率=94.79%，P=0.002；DU145：抑制率=84.78%，P=0.002）；轉(zhuǎn)染siE2F1的細(xì)胞株，E2F1表達(dá)量亦明顯下降（Lncap：抑制率=79.89%，P=0.006；DU145：抑制率=77.30%，P=0.002）；轉(zhuǎn)染了HI-E2F1的細(xì)胞株，E2F1表達(dá)量明顯升高（Lncap：Fold change=14424，

25、P<0.001；DU145：Fold change=8680.73，P<0.001）。細(xì)胞構(gòu)建成功后，做了Western blot檢測(cè)，以了解PBK是否隨E2F1表達(dá)變化。結(jié)果表明，在DU145和Lncap細(xì)胞株中PBK均隨E2F1變化而變化，而抑制PBK的細(xì)胞株中，E2F1并沒有明顯改變。最后，利用CHIP-PCR做轉(zhuǎn)錄調(diào)控分析發(fā)現(xiàn)Lncap細(xì)胞株中實(shí)驗(yàn)組比陰性對(duì)照組表達(dá)升高（Fold change=2.71）。以上結(jié)果均證明PBK在

26、mRNA和蛋白層面表達(dá)均與E2F1表達(dá)相關(guān)，且受E2F1轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
　　PBK的mRNA與蛋白在前列腺癌組織中表達(dá)升高且與惡性程度相關(guān)：在以前研究中，將前列腺癌樣本和癌旁組織作為對(duì)照組，通過高通量mRNA基因芯片技術(shù)，檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞中mRNA的表達(dá)情況。mRNA芯片結(jié)果表明，PBK是上調(diào)比較顯著的mRNA分子（Fold change=16.33，P<0.05，http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/，ac

27、cession number GSE28204）。為了驗(yàn)證基因芯片的結(jié)果是否可靠，重新收取3對(duì)PCa及良性組織樣本做QPCR檢測(cè)，結(jié)果顯示與芯片一致，在腫瘤中PBK高表達(dá)。為了驗(yàn)證PBK是否在蛋白水平也表達(dá)升高，利用了4例前列腺癌及4例良性前列腺組織行Western blot檢測(cè)，結(jié)果前列腺癌組織中PBK表達(dá)蛋白明顯升高。
　　另外，采用了免疫組化技術(shù)對(duì)98例前列腺癌及81例良性前列腺組織進(jìn)行染色，以了解PBK在PCa及良性前列腺

28、組織中表達(dá)差異及表達(dá)部位。結(jié)果發(fā)現(xiàn)PBK主要在細(xì)胞膜及細(xì)胞核中表達(dá)，且在PCa中表達(dá)明顯高于良性前列腺組織。進(jìn)一步，在Gleason評(píng)分≥8與病理分期≥T3A的病例中，PBK的IRS評(píng)分也比對(duì)應(yīng)的分組評(píng)分高，分別是（GS≥8=5.25±0.80，n=70 VS GS<8=4.34±1.47，n=28；P=0.001）（≥T3A期=5.25±0.80，n=70 VS

29、PCa中高表達(dá)，且表達(dá)越高，PCa病理分化越差、臨床分期更偏向晚期。
　　E2F1和PBK高表達(dá)可增加前列腺癌細(xì)胞株的侵襲性、遷移及增殖能力：已成功構(gòu)建的細(xì)胞株（前面已敘述），詳細(xì)做了細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，了解E2F1和PBK對(duì)細(xì)胞功能的影響。Transwell實(shí)驗(yàn)每個(gè)細(xì)胞株我們都觀察了12小時(shí)和24小時(shí)，可以清楚地看到，siPBK和siE2F1細(xì)胞株的侵襲性均比對(duì)照組弱，而HI-E2F1細(xì)胞株的侵襲性比對(duì)照組強(qiáng)，Lncap及DU45細(xì)胞

30、株均如此。Wound healing實(shí)驗(yàn)中，觀察了細(xì)胞6h、24h和48h細(xì)胞遷移情況。在DU145細(xì)胞株中，siPBK細(xì)胞株在24h及48小時(shí)中遷移能力較對(duì)照組弱，si E2F1及HI-E2F1未見明顯差異。而在Lncap細(xì)胞株中，siPBK及si E2F1細(xì)胞株在24h及48h的遷移能力均較對(duì)照組弱，HI-E2F1與它們相反。增殖實(shí)驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)結(jié)果與Transwell相似，在Lncap及DU45細(xì)胞株的siPBK和si E2F1細(xì)胞株

31、的增殖能力均比對(duì)照組弱，而HI-E2F1細(xì)胞株的增殖能力比對(duì)照組強(qiáng)。
　　PBK表達(dá)與PCa臨床特征的關(guān)系：PBK表達(dá)與PCA臨床病例特征之間的關(guān)系詳見表格3。在我們的數(shù)據(jù)中，PBK高表達(dá)組前列腺癌組織與老年(P=0.022)、高Gleason評(píng)分(P=0.003)及高臨床病理分期相關(guān)。Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)中的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)結(jié)果與我們相似，PBK高表達(dá)與老年(P=0.044)、高Gleason評(píng)分(P=0.009)、高臨床病理分期(P=0

32、.019)、臨床轉(zhuǎn)移(P<0.001)、總體生存率(P=0.008)及PSA生化復(fù)發(fā)(P=0.004)相關(guān)。
　　PBK高表達(dá)與PCa的生發(fā)復(fù)發(fā)相關(guān)：為了了解PBK與臨床預(yù)后相關(guān)性，運(yùn)用Kaplan-Meier分析PBK與無生化復(fù)發(fā)率及總體生存率之間的關(guān)系，以Taylor數(shù)據(jù)庫(kù)中PBK表達(dá)的中位數(shù)將所有前列腺癌病例分成高表達(dá)組（n=71）和低表達(dá)組（n=69）。發(fā)現(xiàn)PBK表達(dá)與前列腺癌患者的總體生存率無顯著相關(guān)。而我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，

33、它與無生化復(fù)發(fā)生存率顯著相關(guān)。
　　由此，進(jìn)一步確定PBK是否為預(yù)測(cè)前列腺癌患者無生化復(fù)發(fā)生存率的獨(dú)立預(yù)后因素，采用用Cox回歸模型（cox regression）進(jìn)行單因素綜合分析。在PBK原位雜交的隊(duì)列中，單因素分析表明，PBK表達(dá)越低，Gleason score越高，病理分期越高，則總體生化復(fù)發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)越大。
　　結(jié)論：
　　1. E2F1與PBK都在PCa中表達(dá)升高；
　　2. E2F1與PBK在前列腺癌中