E2F1對細胞凋亡及β-catenin-TCF通路作用的研究.pdf

1、轉錄因子E2F1能夠調節(jié)大量基因的表達，這些E2F1目標基因在細胞周期進程，DNA合成和有絲分裂中都有非常重要的作用。而E2F1的過量表達不僅能強烈驅使細胞進入S期，同時也能誘導細胞凋亡。雖然已有大量文獻報道E2F1能夠通過上調ARF活性而誘導p53依賴的凋亡，但是對E2F1誘導的p53不依賴的細胞凋亡機制還不清楚。 在此，我們發(fā)現(xiàn)E2F1能夠通過線粒體促凋亡蛋白Smac/DIABLO的啟動子區(qū)域上兩個E2F1結合位點(bind

2、ing site)BS2(-542～535bp)和BS3(-200～-193bp)直接結合到Smac/DIABLO的啟動子上，并激發(fā)其啟動子的活性。同時，在我們的實驗中發(fā)現(xiàn)，BS2和BS3似乎在E2F1的激活和調節(jié)中起協(xié)同作用。我們還檢測了除E2F1以外的其他E2F家族轉錄激活子，如E2F2和E2F3，發(fā)現(xiàn)Smac/DIABLO啟動子僅能特異性的被E2F1所激活。然后，我們構建了一個E2F1活性能被條件性激活的細胞H1299ER-E2F

3、1，利用該細胞我們發(fā)現(xiàn)，當E2F1活性被激活時，其內源的Smac/DIABLO的mRNA和蛋白水平都隨之上調，同時引起線粒體依賴的凋亡。反之，當我們利用RNA干擾技術，抑制了內源性Smac蛋白水平時，相同情況下，E2F1活性上調引起的細胞凋亡也受到削弱。因此，我們的實驗結果說明，E2F1能夠通過直接上調其下游，如Smac/DIABLO等線粒體凋亡蛋白而誘導不依賴于p53的細胞凋亡通路。 E2F1是細胞活動的重要調節(jié)因子，在細胞增

4、殖和凋亡中都具有非常重要的作用。在健康細胞中，E2F1的活性在時空上都受到pRB/E2F通路的嚴格控制，但在多數(shù)腫瘤中，該通路的頻繁突變導致E2F1活性的失控，從而引起細胞惡性增殖，因此E2F1被認為是腫瘤生成中的重要原癌基因。同時，E2F1也能誘導細胞凋亡，表現(xiàn)出抑制腫瘤生成的能力。但是，對于E2F通路與細胞中其他重要信號轉導通路的相互關系現(xiàn)在還知之甚少。 在此，我們發(fā)現(xiàn)E2F1能夠直接同泛素連接酶Siah1的啟動子區(qū)域相結合

5、并激活該啟動子活性。外源表達的E2F1能夠上調Siah1的表達水平而當用RNA干擾技術降低內源E2F1表達水平時，Siah1也隨之減少。我們還發(fā)現(xiàn)，外源E2F1的表達能夠抑制細胞內Wnt/β-catenin/TCF通路活性，該作用在內源Siah1被相應shRNA抑制后明顯減弱。綜合這些結果，我們認為Siah1是E2F1的目標基因，E2F1能夠通過轉錄上調Siah1的表達量限制Wnt/β-catenin/TCF通路的活性。這可能反應了細胞