脂肪細胞分化過程中PAI-1基因表達的調(diào)控.pdf

1、近年來,肥胖逐漸被認識到是導致動脈粥樣硬化和心血秘疾病的重要危險因素之一.并在許多代謝性疾病如高甘油脂血癥,高血壓,主胰島素血癥和非胰島素依賴性糖尿病等有著密切的相關性.體外進行肥胖研究主要是用3T3-L1或3T3-F442A作為模型.在3T3-L1細胞分化為脂肪細胞的過程中,胰島素（Iinsulin,Ins),地塞米松（dexamethasone,Dex)及甲基異丁基黃嘌吟（methylisobutylxanthine,Mix)是前脂

2、肪細胞轉化為成熟脂肪細胞的關鍵誘導因子.該文首先檢測了在3T3-L1細胞分化過程中,Ins,Dex及Mix對PAI-1基因表達的影響.然后分析并鑒定了小鼠PAI-1啟動子中影響PAI-1表達的Ins和Dex及C/EBPs順式作用元件（cis-acting element),最后在C57BL/6J小鼠中觀察了Ins,Dex對小鼠附睪脂肪墊中PAI-1基因表達的影響.一胰島素、地塞米松和甲基異丁基黃嘌呤對3T3-L1前脂肪細胞分化過程中PA

3、I-1基因表達的影響;為研究胰島素,地塞米松和甲基異丁黃嘌呤對脂肪細胞分化過程及纖溶酶原激活劑抑制劑-1（PAI-1）基因表達的影響.利用體外培養(yǎng)的3T3-L1細胞分化模型,觀察了胰島素與地塞米松及甲基異丁黃嘌呤加入前后脂肪細胞形態(tài)的變化.并應用RT-PCR方法,在不同濃度的Ins,Dex和Mix及其不同組合的條件下,對3T3-L1細胞分化為脂肪細胞過程中PAI-1mRNA表達水平進行相對定量分析（以β-actin為內(nèi)對照）.我們的研究

4、結果表明：在Ins,Dex,Mix三因子單獨及其不同組合,Ins,Dex單獨及Ins加Dex都對3T3-L1細胞中PAI-1基因的表達有顯著促進作用,尤以后者最為顯著并表現(xiàn)出疊加效應,這為進一步研究PAI-1啟動子上的相應順式元件,搜尋Ins,Dex對PAI-1基因表達的作用機制提供了實驗基礎.二小鼠PAI-1基因啟動子中Dex和C/EBPs順式作用元件的分析和鑒定;在研究了Ins,Dex和Mix對脂肪細胞分化過程中PAI-1基因表達的

5、影響的基礎上,進一步探討Ins,Dex調(diào)控PAI-1基因轉錄表達的機制,應用限制性內(nèi)切酶,PCR擴增和DNA重組技術,構建含螢光素酶(Luciferase)基因和PAI-1啟動子（Promoter)不同長度片段的嵌合質粒,轉染3T3-L1前脂肪細胞并測定報告基因（Luciferase)的活性.結果提示：Dex可能是通過激活轉錄因子（糖皮質激素受體,GR）與DexRE的結合來促進PAI-1基因的表達,同時在完全分3T3-L1脂肪細胞中,C