高頻電刺激對(duì)PC12類神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能的影響.pdf

1、目的：研究細(xì)胞外高頻電刺激（high frequency stimulation，HFS）對(duì)PC12類交感神經(jīng)細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)Ca2+、cPKC和自身P-PKC的影響，為深入探討細(xì)胞內(nèi)Ca2+影響TH的表達(dá)提供相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 方法：將HFS作用于傳代PC12類交感神經(jīng)細(xì)胞株，HFS參數(shù)為：刺激頻率130 Hz，通過電流500 μA，脈沖寬度60 μs；每天固定時(shí)間刺激3 h，持續(xù)3 d。對(duì)照組HFS為零。分別用H E染色、

2、免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)經(jīng)HFS后PC12類交感神經(jīng)細(xì)胞在光鏡下形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化；應(yīng)用激光共聚焦掃描顯微鏡觀測(cè)即刻HFS前后以及連續(xù)3 d HFS停止前后單個(gè)PC12類神經(jīng)活細(xì)胞內(nèi)Ca2+動(dòng)態(tài)變化，并通過L型電壓敏感鈣通道阻滯劑尼非地平（nifedipine，NIF）以證實(shí)HFS可引起PC12類神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+變化；通過Western Blot方法檢測(cè)HFS后，NIF對(duì)經(jīng)典蛋白激酶C（conventional protein kinase

3、C，cPKC）及其自身磷酸化蛋白激酶C（Phospho-PKC（βII)，P-PKC）在PC12類神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的影響。 結(jié)果：與對(duì)照組比較，HFS后PC12類神經(jīng)細(xì)胞光鏡下突起長(zhǎng)度顯著縮短，突起個(gè)數(shù)明顯減少（P<0.01）；免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，HFS后PC12類神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)灰度降低，提示酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase，TH)代謝水平在HFS后有顯著下降（P<0.01）。激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察到，與

4、HFS前比較，HFS后，即刻觀察到胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度迅速降低，經(jīng)線掃描和面掃描顯示降低幅度分別達(dá)47.7 ％和2.1 ％；連續(xù)刺激3 d，每天3 h，停止刺激后，胞內(nèi)Ca2+熒光強(qiáng)度迅速增強(qiáng)，增強(qiáng)幅度分別達(dá)60 ％和3.5 ％。該作用被L型電壓敏感鈣通道阻滯劑NIF（終濃度2 μM）減弱。與對(duì)照組比較，連續(xù)3 d刺激組，細(xì)胞內(nèi)cPKC及P-PKC含量明顯增加，而經(jīng)NIF（終濃度2 μM）處理的連續(xù)3 d刺激組，細(xì)胞內(nèi)cPKC及P-PK

5、C含量無明顯變化。 結(jié)論： 1. HFS對(duì)PC12類交感神經(jīng)細(xì)胞有抑制作用，它抑制PC12類交感神經(jīng)細(xì)胞的軸突生長(zhǎng)及降低分泌顆粒的代謝水平。 2. HFS誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)Ca2+經(jīng)L型鈣通道釋放，對(duì)PC12類神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)第二信使調(diào)節(jié)有顯著影響，而L型電壓敏感鈣通道阻滯劑NIF能降低HFS對(duì)PC12類神經(jīng)細(xì)胞的抑制作用，但并非完全抑制。 3. HFS可增強(qiáng)PC12細(xì)胞內(nèi)cPKC及P-PKC的表達(dá)，而這種現(xiàn)象可被NI