傘花木和白頭翁中的醌還原酶誘導(dǎo)劑的快速發(fā)現(xiàn).pdf

1、傘花木(Eurycorymbus cavaleriei(Levl，) Rehd. et Hand.-Mazz.)收載于《中國植物志》，系無患子科傘花木屬植物，為中國特有的單種屬植物，屬國家二級(jí)保護(hù)植物。傘花木的研究集中在生物遺傳、組織培養(yǎng)、品種保護(hù)等方面，其化學(xué)成分及生物活性未見報(bào)道。白頭翁(Pulsatilla chinensis(Bunge) Regel)是一種有著悠久藥用歷史的中藥，用于治療痢疾、瘧疾、陰道滴蟲和細(xì)菌感染等，化學(xué)及

2、藥理研究表明三萜皂苷是其重要的生物活性成分。
　　 細(xì)胞二相代謝酶在化學(xué)致癌劑和其它有害氧化劑的代謝中具有重要作用。因而對(duì)醌還原酶具有誘導(dǎo)活性的成分被認(rèn)為在腫瘤起始階段具有潛在的癌癥預(yù)防作用。二相酶水平的上調(diào)被認(rèn)為是預(yù)防癌癥發(fā)生的主要機(jī)制。
　　 本文對(duì)兩種植物的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，基于HPLC/ESI_MSn分析手段，采用與還原型谷胱甘肽的結(jié)合方法快速發(fā)現(xiàn)兩種植物提取物中具有醌還原酶( QR)誘導(dǎo)作用的化學(xué)成分，并用細(xì)

3、胞篩選方法進(jìn)行了驗(yàn)證；同時(shí)運(yùn)用銀離子復(fù)合法對(duì)兩種植物的三萜類成分的質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行了研究。主要研究?jī)?nèi)容及成果如下：
　　 1.采用柱色譜對(duì)傘花木細(xì)枝的95％乙醇提取物的石油醚及二氯甲烷萃取部位進(jìn)行了分離純化。運(yùn)用IR、UV、ESI-MS、HRESI-MS、1H NMR、13C NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、NOESY等波譜手段和理化性質(zhì)鑒定了其中27個(gè)化合物的結(jié)構(gòu)。這些化合物均為首次從該植物中分離得到，其中三

4、萜類成分11個(gè)，全部為新發(fā)現(xiàn)的三萜，分別鑒定為3p，6p，7p，11α-tetrahydroxy-21aH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T1)，11α-acetyloxy-7β-benzoyloxy-3β，6β-dihydroxy-21aH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T2)，11α-acetyloxy-7β-caproyloxy-3β，6β-dihydroxy

5、-21α，H-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T3)，7β-benzoyloxy-3β，6β，11α-trihydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T4)，6β-acetyloxy-3β，12β-dihydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T5)，7β-benzoyloxy-3β，6β，11β-tri

6、hydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T6)，6β-acetyloxy-7β-benzoyloxy-3β，11β-dihydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T7)，6β-acetyloxy-12β-benzoyloxy-3β-hydroxy-21αH-24-norhopa-4(23)，22(29)-diene(EU-T8)，3β，

7、12β-dihydroxy-21αH-hop-22(29)-ene-24-oic acid methyl ester(EU-T9)，6β-acetyloxy-3β，11β-dihydroxy-21αH-hop-22(29)-ene-24-oic acid methyl ester(EU-T10)，7β-benzoyloxy-3β，24ζ，25-trihydroxy-dammar-20(21)-ene(EU-T11)，并命名為傘花木三萜A

8、-K。另外發(fā)現(xiàn)新聯(lián)苯1個(gè)，鑒定為4，4'-dihydroxy-5，5'-bis[(2S，4Z)-6-hydroxy-5-methyl-2-(1-methylethenyl)hex-4-en-1-yl]-3，3'-bis(3-methylbut-2-en-1-yl)-2，2'-biphenyl-1，1'-dicarboxaldehyde(EU-3)，命名為cavalerol。
　　 2.采用柱色譜對(duì)白頭翁95％乙醇提取物的石油醚及

9、二氯甲烷萃取部位進(jìn)行了分離純化。運(yùn)用IR、UV、ESI-MS、HRESI-MS、1H NMR、13C NMR、HSQC、HMBC、1H-1H COSY、NOESY等波譜手段和理化性質(zhì)鑒定了11個(gè)三萜皂苷、1個(gè)醌類和1個(gè)噻吩類的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
　　 3.建立了傘花木95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位中具有醌還原酶誘導(dǎo)活性的成分的HPLC/ESI_MSn快速發(fā)現(xiàn)方法。首先對(duì)從傘花木中分得的9個(gè)香豆素對(duì)照品進(jìn)行直接進(jìn)樣分析，根據(jù)多級(jí)質(zhì)譜碎

10、片離子推導(dǎo)其裂解規(guī)律，區(qū)分同分異構(gòu)體。然后以這些規(guī)律為基礎(chǔ)，對(duì)傘花木的95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位與還原型谷胱甘肽反應(yīng)前后化學(xué)成分的變化進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析，推測(cè)出了具有QR誘導(dǎo)作用的2個(gè)香豆素類成分。
　　 4.建立了白頭翁95％乙醇提取物的石油醚萃取部位中具有醌還原酶誘導(dǎo)活性的成分的HPLC/ESI-MSn快速發(fā)現(xiàn)方法。對(duì)白頭翁的95％乙醇提取物的石油醚萃取部位與還原型谷胱甘肽反應(yīng)前后化學(xué)成分的變化進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析，推測(cè)出

11、了具有QR誘導(dǎo)作用的1個(gè)醌類化合物和1個(gè)噻吩類化合物。
　　 5.利用HPLC-ESI-MSn分析發(fā)現(xiàn)了白頭翁95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位中的兩類具相同分子量母核的三萜皂苷的銀離子復(fù)合物在正離子模式下不同的質(zhì)譜裂解行為。對(duì)銀離子/三萜皂苷復(fù)合物進(jìn)行直接進(jìn)樣分析，推導(dǎo)出齊墩果烷型三萜皂苷的兩種裂解途徑，并對(duì)白頭翁95％乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用分析，可區(qū)分植物粗提物中的兩類皂苷。
　　 6.利用ESI-