用于硫化氫和醌氧化還原酶1檢測(cè)的新型熒光探針.pdf

1、H2S是生物體內(nèi)一種重要的氣體信號(hào)分子，參與多種病理及生理過(guò)程。體內(nèi)H2S濃度的改變與多種疾病有關(guān)，如阿爾茨海默癥（即老年癡呆）、唐氏合癥、糖尿病、肝硬化、慢性阻塞性肺疾病等。研究開(kāi)發(fā)具有特定細(xì)胞器靶向性的硫化氫探針，可對(duì)細(xì)胞特定區(qū)域內(nèi)的硫化氫進(jìn)行可視化監(jiān)測(cè)，有利于深入了解硫化氫的生物學(xué)功能。NADH:醌氧化還原酶1(NQO1)是一種黃素蛋白酶，它在哺乳動(dòng)物各個(gè)組織器官中均有表達(dá)，但在多種癌癥組織中過(guò)度表達(dá)。研究開(kāi)發(fā)靈敏、特異的NQO1

2、熒光探針，并將其用于細(xì)胞內(nèi)NQO1的實(shí)時(shí)、可視化檢測(cè)，對(duì)研究活細(xì)胞內(nèi)NQO1的表達(dá)水平、空間分布及生物學(xué)功能具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
　　本論文主要開(kāi)展了以下工作:
　　1.以3-氨基苯酚，氯甲酸乙酯，4-氯乙酰乙酸乙酯，嗎啉，疊氮化鈉等為原料，設(shè)計(jì)合成了一種以香豆素為熒光基團(tuán)的溶酶體靶向H2S熒光探針，并通過(guò)1HNMR，13C NMR及MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。該探針在355 nm激發(fā)光激發(fā)下，熒光微弱，無(wú)明顯發(fā)射峰;與H2S共

3、孵育15分鐘后，在相同的激發(fā)波長(zhǎng)下，發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光，其最大發(fā)射波長(zhǎng)為458 nm，且熒光強(qiáng)度隨硫化氫濃度增加而逐漸增強(qiáng)。此熒光探針的熒光響應(yīng)信號(hào)與H2S的濃度呈線性相關(guān)，其線性響應(yīng)范圍為0-20μmol/L，檢測(cè)限為37 nmol/L。常規(guī)干擾試驗(yàn)結(jié)果表明，該探針對(duì)硫化氫具有良好的選擇性。探針在pH5-7范圍內(nèi)熒光響應(yīng)信號(hào)穩(wěn)定，表明該探針適用于檢測(cè)溶酶體中的硫化氫。將探針用于活細(xì)胞內(nèi)硫化氫的激光共聚焦成像分析，結(jié)果表明，該探針具有良

4、好的溶酶體靶向性。
　　2.以7-氨基-4-甲基香豆素以及三甲基醌丙酸為原料設(shè)計(jì)合成了一種NQO1熒光探針，并通過(guò)1H NMR，13C NMR及MS對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。該探針在355nm激發(fā)光激發(fā)下熒光微弱，無(wú)明顯發(fā)射峰;探針溶液與NQO1在37℃下孵育40分鐘后，用相同波長(zhǎng)的激發(fā)光激發(fā)，在449 nm處出現(xiàn)強(qiáng)的熒光發(fā)射峰，且熒光強(qiáng)度變化與NQO1的濃度呈線性相關(guān)，其線性響應(yīng)范圍為5-150 ng/mL，檢測(cè)限為1.76 ng/m