生姜中醌還原酶誘導(dǎo)子的分離、鑒定及其誘導(dǎo)作用研究.pdf

1、外源性化學(xué)致癌物對(duì)機(jī)體的損傷是誘發(fā)癌癥等惡性疾病的重要因素，這些致癌物在體內(nèi)的代謝解毒需經(jīng)歷I相和II相代謝。由于I相代謝往往會(huì)激活某些致癌物前體，而II相代謝可以有效清除自由基和親電試劑，使致癌物真正地解毒失活。因此，選擇性地誘導(dǎo)II相酶有助于外源性致癌物在體內(nèi)的代謝解毒，這極大地激發(fā)了人們尋找具有II相酶誘導(dǎo)活性的化合物的興趣。隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)人工合成的誘導(dǎo)劑往往具有較高的毒性，因此人們將目光轉(zhuǎn)向天然產(chǎn)物，期望從中獲得高效低

2、毒的誘導(dǎo)子。
　　生姜是一種歷史悠久的傳統(tǒng)藥食兼用植物，富含多種營(yíng)養(yǎng)和功能成分，在中國(guó)及東南亞地區(qū)被廣泛用作調(diào)味品及藥材。藥理學(xué)研究表明，生姜及其提取物具有抗炎、鎮(zhèn)吐、抗腫瘤和抗菌作用等生物學(xué)活性，但目前有關(guān)生姜成分對(duì)II相酶誘導(dǎo)活性及機(jī)制的研究報(bào)道較少。本研究旨在以生姜為原料，以對(duì)醌還原酶的誘導(dǎo)能力為活性導(dǎo)向，從中篩選具有II相誘導(dǎo)活性的功能成分，并初步探討了這些成分的誘導(dǎo)作用機(jī)制。
　　本研究主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)論如下：

3、r>　　1．收集了全國(guó)有代表性的生姜品種32個(gè)，采用索氏提取法制備了其乙醇粗提物，比較了醇提物對(duì)DPPH?、ABTS?+和羥基自由基的清除作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，32種生姜中，清除DPPH?自由基能力最強(qiáng)的是永康黃姜和云南黃姜，最弱的為遵義大姜。清除ABTS?+自由基效果較好的是永康黃姜、云南黃姜和河南大姜，犍為黃口姜清除活性最弱。清除?OH自由基能力較強(qiáng)的有廣東疏輪黃姜、浙江紅爪姜、廣西小黃姜、云南黃姜和福建小姜，彼此間沒(méi)有明顯差異，最弱的是

4、羅平黃姜。
　　2．測(cè)定了32種生姜中總酚和總黃酮的含量。發(fā)現(xiàn)永康黃姜的總酚含量最高，其次為河南小姜以及河南大姜，總酚含量最低的是廣東梅州白姜?？傸S酮含量最高的是永嘉黃姜，最少的是永康黃姜。通過(guò)分析總酚和總黃酮含量與抗氧化能力的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)DPPH?和ABTS?+清除體系的結(jié)果相似，均呈極顯著相關(guān)（P<0.01）；總酚含量與清除DPPH?和 ABTS?+自由基能力呈極顯著相關(guān)（P<0.01），而與清除?OH能力不相關(guān)（P>0.05

5、）；與總酚相比，黃酮含量與三者自由基清除能力均沒(méi)有顯著相關(guān)性（P>0.05）。
　　3．分析了32種生姜提取物的細(xì)胞毒性，在此基礎(chǔ)上采用甲萘醌-噻唑藍(lán)比色法，比較了其誘導(dǎo)QR活性潛力，篩選出活性較高的生姜品種—廈門(mén)土姜。進(jìn)一步結(jié)合薄層層析、硅膠柱色譜層析、高效液相色譜對(duì)其乙酸乙酯萃取物進(jìn)行分離，結(jié)合LTQ-Orbitrap-MSn、標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)等方法鑒定其結(jié)構(gòu)，從中篩選出具有潛在誘導(dǎo)能力的成分：6-姜烯酚、6-姜酚、姜黃素、四氫姜黃

6、素和去甲氧基姜黃素。
　　4．為進(jìn)一步探索誘導(dǎo)子的作用機(jī)制，我們利用鼠肝癌Hepa1c1c7細(xì)胞模型，采用Western Blot方法分析了上述誘導(dǎo)子對(duì)Nrf2-Keap1信號(hào)通路的影響。結(jié)果表明，5種誘導(dǎo)子處理24 h均能刺激Nrf2從細(xì)胞質(zhì)向細(xì)胞核內(nèi)轉(zhuǎn)移，同時(shí)顯著抑制Keap1蛋白表達(dá)，其中去甲氧基姜黃素效果最為顯著，說(shuō)明生姜中QR誘導(dǎo)子的作用機(jī)制與 Nrf2-Keap1通路有關(guān)。應(yīng)用RNA-seq轉(zhuǎn)錄組分析技術(shù)初步探索了誘導(dǎo)