醌氧化還原酶及其抑制劑在乳腺癌增殖與遷移中的作用研究.pdf

1、乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一，也是女性死亡的第二大原因。醌氧化還原酶（NQO1）是一種保護細胞免受氧化損傷的黃色素酶，更是一種人體內(nèi)一種非常重要的化學致癌物代謝酶。近年來發(fā)現(xiàn)，NQO1在黑色素瘤、胰腺癌、肝內(nèi)膽管癌、肺癌和乳腺癌等多種惡性腫瘤中表達異常，并與這些腫瘤的早期診斷和不良預后關系密切，但尚未見其與乳腺癌之間的關系報道。β-拉帕醌（β-lapachone）是NQO1蛋白的一種有效抑制劑，提取于中南美洲紫檀樹的樹皮中，研究

2、表明，β-拉帕醌可誘導前列腺癌、乳腺癌、白血病等多種腫瘤細胞的凋亡，也可作為一種治療結(jié)腸癌和前列腺癌的放射增敏劑，但其在乳腺癌中的作用和機制尚不清楚。
　　目的：探討NQO1蛋白過表達在乳腺癌中的臨床病理學意義及在預后評估中的臨床意義；深入研究其抑制劑β-拉帕醌體外抑制乳腺癌增殖與遷移能力的作用機制。
　　材料和方法：應用免疫組化方法在52例癌旁正常組織、22例乳腺增生組織、45例乳腺原位癌組織（DCIS）和176例乳腺癌組

3、織中檢測NQO1蛋白的表達情況，采用細胞免疫熒光實驗檢測NQO1在MCF-7乳腺癌細胞中的定位情況；并利用qRT-PCR和Western blot方法檢測8例新鮮乳腺癌及癌旁正常組織中NQO1基因mRNA和蛋白水平的表達，分析NQO1異常表達與乳腺癌臨床病理學特征之間的相關性，生存期分析驗證NQO1對患者預后評估的價值。傳代培養(yǎng) MCF-7乳腺癌細胞株；噻唑藍（MTT）實驗檢測與增殖、凋亡、EMT標志物及PI3K/Akt/mTOR信號通

4、路相關蛋白的表達情況。對細胞增殖的抑制作用；通過劃痕實驗檢測β-拉帕醌抑制MCF-7乳腺癌細胞遷移的能力；Western-blot法檢測β-拉帕醌處理對 MCF-7乳腺癌細胞中 NQO1蛋白、增殖標志物、EMT標志物及PI3K/Akt/mTOR信號通路相關蛋白表達的影響。
　　結(jié)果：1.乳腺癌新鮮組織的Western blot及qRT-PCR方法檢測顯示，乳腺癌組織中NQO1的蛋白及mRNA的水平明顯高于癌旁正常組織；免疫組化結(jié)果

5、亦表明，NQO1蛋白表達陽性率和強陽性率（84.7％、61.9%）明顯高于DCIS組織（51.1%、31.1%）、乳腺增生組織（36.7%、13.6%）及癌旁正常組織（30.8%、13.5%），差異顯著（P<0.05）；NQO1蛋白高表達與乳腺癌患者的分化程度、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Her2表達水平密切相關。生存期分析顯示，NQO1高表達的乳腺癌患者的無瘤生存期及10年生存期均低于NQO1低表達者（P<0.01）；單因素分析顯示NQ

6、O1表達聯(lián)合分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Her2表達水平可以共同影響總生存率，但多因素分析結(jié)果表明，只有臨床分期、NQO1及Her2表達水平是乳腺癌不良預后的獨立風險因子；2. MTT實驗結(jié)果表明，β-拉帕醌（濃度為4μM）給藥處理后，MCF-7細胞的增殖能力明顯下降（P<0.05），Western blot結(jié)果顯示，β-拉帕醌通過下調(diào)Skp2和DEK蛋白的表達調(diào)節(jié)參與乳腺癌細胞的增殖調(diào)控。劃痕實驗結(jié)果顯示，β-拉帕醌（濃度為4μM

7、）可以明顯抑制MCF-7細胞的遷移能力（P<0.05）。而且Western blot結(jié)果表明，β-拉帕醌主要通過下調(diào)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）間質(zhì)標記物Snail、Vimentin、GSK-3β等的表達水平、上調(diào)EMT上皮標志物E-cadherin表達影響MCF-7細胞的遷移能力；3.β-拉帕醌可以下調(diào)MCF-7細胞中PI3K/Akt/mTOR相關信號通路蛋白p-AKT和p-PTEN的表達。
　　結(jié)論：1. NQO1高表達與乳腺癌的預