5α-還原酶抑制劑與DU145細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的研究.pdf

1、隨著我國(guó)人口老齡化趨勢(shì)的加深,前列腺類疾病日益凸顯,嚴(yán)重影響中老年人的生活質(zhì)量,其中良性前列腺增生(BPH)與前列腺癌(PCa)危害甚深.文獻(xiàn)研究表明,人體內(nèi)的睪酮(T)可在5α-還原酶的催化作用下依賴還原性輔酶Ⅱ(NADPH)提供氫離子轉(zhuǎn)化為具有更強(qiáng)生物活性的二氫睪酮(DHT).DHT在體內(nèi)的積聚與BPH的產(chǎn)生有著直接聯(lián)系.在PCa發(fā)病初期,阻斷雄性激素往往可以使癥狀得以緩解,但最終腫瘤細(xì)胞會(huì)朝非雄性激素依賴性轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致治療失效.

2、 采用系統(tǒng)溶劑提取車(chē)前子、熟地黃、澤瀉、川牛膝等中藥材,并用硅膠柱層析初步分離提取物,建立了用于篩選5α-原酶抑制劑與DUl45細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的天然藥物初步分離提取庫(kù). 對(duì)比吸光度檢測(cè)與熒光檢測(cè)NADPH的準(zhǔn)確度與精確度,選擇熒光法建立5α-還原酶抑制劑的體外篩選模型,最終條件為:激發(fā)波長(zhǎng)360 nm,發(fā)射波長(zhǎng)465 nm,NADPH 40μM,T 20μM,5α-還原酶提取物5 mg/ml,提取物濃度100μg/ml,非那

3、雄胺(陽(yáng)性對(duì)照)21μM,總體積120μl,37℃反應(yīng)10 min.經(jīng)過(guò)篩選發(fā)現(xiàn):車(chē)前子、熟地黃、澤瀉、川牛膝均存在某些對(duì)50α-原酶有一定的抑制作用的提取部位,其中以澤瀉的正丁醇提取部位抑制活性最強(qiáng). 通過(guò)應(yīng)用四噻唑藍(lán)(MTT)比色法,對(duì)人體前列腺非雄性激素依賴性腫瘤細(xì)胞株DUl45進(jìn)行了生長(zhǎng)抑制劑的篩選.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,車(chē)前子正丁醇提取物經(jīng)硅膠柱層析所得到的第二段收集物中所含物質(zhì)對(duì)DUl45細(xì)胞生長(zhǎng)具有很強(qiáng)的抑制活性,其IC<